EPO对失血性休克合并内毒素血症兔TNFα、IL6、IL10、MDA影

【摘要】 [目的]观察内毒素血症引起兔脂质过氧化产物、炎症因子水平改变，运用促红细胞生成素(EPO)进行干预。[方法]兔股动脉放血造休克随后复苏，予腹腔注射内毒素，两次打击造成兔多脏器功能不全模型;24只健康新西兰大白兔随机分成对照组、二次打击组、EPO组，每组8只;造模前后留取血标本用于检测TNFα、IL6、IL10、MDA等指标。[结果]二次打击致其它两组MDA水平明显高于对照组，EPO组MDA水平较二次打击组明显降低;二次打击致其它两组TNFα、IL6、IL10水平明显高于对照组，EPO组明显低于二次打击组。[结论]TNFα，IL6，IL10等炎症因子与MDA等脂质过氧化产物参与了失血性休克合并内毒素血症所致多脏器损伤的过程，EPO能降低失血性休克合并内毒素血症兔炎症因子及脂质过氧化产物水平。

【关键词】 内毒素血症;促红细胞生成素;多脏器功能不全;炎症因子。

Abstract： [Objective]To explore the rabbits’ lipid peroxidation and cytokine level change caused by endotoxemia，use EPO for intervention.[Method]Bleed rabbits femoral for shock，after coming to，make injection of endotoxin，two beatings make dysfunctional multiorgans model;randomly divide 24 healthy rabbits into control group(1)，2beating group(2)，EPO group(3)，8 in each;take blood for testing indexes of TNFα，IL6，IL10 and MDA.[Result]Group 2 was higher than other groups on MDA level，group 3 less than group 2;group 2 was much higher than other 2 groups on TNFα，IL6 and IL10，group 3 less than group 2.[Conclusion]The cytokines and lipid peroxidation participating in the course of multiorgan injury caused by blood loss shock and endotoxemia can be reduced by EPO.

Key words： endotoxemia;EPO;dysfunctional multiorgans;cytokines。

严重的内毒素血症引起休克、DIC，甚至多器官功能衰竭(MODS)。促红细胞生成素(erythropoietin，EPO)是一种刺激骨髓造血的糖蛋白类激素，主要由肾脏皮质、髓质交界处的肾小管旁细胞分泌，分子量为30.4kd。由于其具有促进造血的作用，在贫血治疗领域得到了广泛应用。鉴于EPO在细胞保护作用研究上的较大进展以及其抗炎作用的发现，本文设计此实验以观察EPO对失血性休克合并内毒素血症所致炎症因子水平及脂质过氧化产物表达的影响。

1 材料与方法。

1.1 实验动物 新西兰大白兔24只，雌雄不限，每只体重1.9～2.5kg，由浙江省医学科学院动物实验中心提供。24只新西兰大白兔随机分成3组：对照组 8只，二次打击组 8只，EPO治疗组 8只。

1.2 实验试剂 重组人促红细胞生成素(rhEPO)(山东科兴生物制品有限公司)。内毒素试剂(LPS，E.coli，O111B4 )(美国SIGMA公司)。丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。兔肿瘤坏死因子酶联免疫分析(TNFα ELISA)试剂盒(美国USCNLIFE公司，产品编号：E0133Rb)。兔白细胞介素6酶联免疫分析(IL6ELISA)试剂盒(美国USCNLIFE公司，产品编号：E0079Rb)。兔白细胞介素10酶联免疫分析(IL10ELISA)试剂盒(美国USCNLIFE公司，产品编号：E0056Rb)。

1.3 实验仪器 Spacelab多功能监护仪(美国Spacelab公司)。Axsym全自动发光免疫分析仪(美国Abbott公司)。BIORAD酶标仪(日本BIORAD公司)。722光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂)。LD42A离心机(北京医用离心机厂)。—70℃超低温冰箱(美国FORMA公司)。HHW21.CU600电热恒温水浴箱(上海医疗器械七厂)。MM1型微量振荡器(江苏康泰医疗器械厂)。XK95B旋涡混合器(江苏康泰医疗器械厂)。

1.4 动物模型制备 二次打击(失血性休克合并内毒素血症)兔模型制作：参考卢瑗瑗等[1]的方法：兔耳缘静脉置留置针，氯氨酮(1.5mg/kg)肌注麻醉，麻醉后固定于手术台;(右股动脉区)股动脉置留置针，接换能器，连接监护仪，监测血压;测压正常后通过股动脉留置针连接三通快速抽出血液(肝素化室温无菌保存)，使兔 MAP降至40mmHg，维持60min，随后回输全部血液及生理盐水使血压恢复至放血前水平，回输时间30min;复苏后予腹腔注射100ug/kg剂量LPS(E.Coli O111B4)，20ml0.9%NS稀释;通过股静脉留置针于造模前，二次打击后 1h，二次打击后6h，二次打击后24h(处死前)取血标本;实验结束时取兔心肌组织标本，浸泡于10%的中性甲醛液。

1.4.1 对照组 分离股动静脉，置管后不予放血，90min后腹腔注射20ml0.9%NS，于置管时及注射NS后 1h、6h、24h(处死前)取血标本，离心后取上清，作CKMB，cTnI，MDA，IL6，IL10，TNFα水平检测;处死兔，取出心脏标本作病理检测。

1.4.2 二次打击组 按步骤制备二次打击兔模型，于造模前，二次打击后 1h、6h、24h(处死前)取血标本，离心后取上清，作CKMB，cTnI，MDA，IL6，IL10，TNFα水平检测;处死兔，取出心脏标本作病理检测。

1.4.3 EPO治疗组 按步骤制备二次打击兔模型，其中第4步在注射LPS结束后，于耳缘静脉注射5000iu/kg剂量EPO，于造模前，二次打击后 1h、6h、24h(处死前)取血标本，离心后取上清，作CKMB，cTnI，MDA，IL6，IL10，TNFα水平检测;处死兔，取出心脏标本作病理检测。

1.5 血清标本制备及保存 将血浆标本室温放置2h后，于3000xg离心10min，取上清收集于锥形瓶中，将标本放于—70℃超低温冰箱保存。

1.6 检测指标及检测方法 血清丙二醛(MDA)含量测定：硫代巴比妥酸(Thibabituric Acid TBA)法。血清肿瘤坏死因子(TNFα)测定法：双抗体夹心法。血清白细胞介素6(IL6)测定法：双抗体夹心法。血清白细胞介素10(IL10)测定法：双抗体夹心法。

1.7 统计学处理 本实验所有计量资料均采用均数±标准差表示，数据资料用SPSS for windows 11.0统计软件包处理，采用F检验进行多组间差异的比较，两两比较用q检验。