抗Ⅱ型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎中的意义
【摘 要】 目的 了解抗Ⅱ型胶原抗体在类风湿关节炎(RA)中的临床意义。 以改进的酶联免疫吸附法(ELISA)检测179例RA患者和171例其他风湿病患者的血清IgG型抗天然及抗变性Ⅱ型胶原抗体水平。结果 RA患者抗天然和抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性率各为22.3%和36.9%，早期RA患者各为30.0%和36.7%。其他风湿病患者中各为3.5%和31.6%，健康人二者均为2.5%。抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性RA患者类风湿因子检出率、患者对病情活动性评价高于阴性组(P0.05)。抗变性Ⅱ型胶原抗体和抗天然Ⅱ型胶原抗体同时阳性RA患者的CRP平均水平较高。结论 抗天然Ⅱ型胶原抗体可以作为RA的一个辅助诊断指标。抗天然与抗变性Ⅱ型胶原抗体的检测有助于判断RA病情活动性。
Anti—type Ⅱ collagen antibodies in rheumatoid arthritis。
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【Abstract】 Objective To investigate the clinical significance of anti—type—Ⅱ—collagens antibody in rheumatoid arthritis (RA).Method Serum IgG antibodies to native and denatured type Ⅱ collagens (anti—nc Ⅱ and anti—dc Ⅱ) were detected in 179 patients with RA by an improved enzyme linked immunosorbent assay (ELISA),and their clinical significance was analysed with corresponding clinical materials.Results In RA,the positive rates of anti—nc Ⅱ and anti—dc Ⅱ were 22.3% and 36.9%;in early RA were 30.0% and 36.7%,respectively.In other rheumatic diseases the positive rates were 3.5% and 31.6%,respectively and were both 2.5% in healthy controls.Anti—nc Ⅱ positive RA showed higher prevalence rate of RF and higher scores of patient′s global assessment of disease activity (P 0.05). presence of anti—nc Ⅱ and anti—dc Ⅱ concomitantly was associated with high CRP level in RA patients.Conclusion Anti—nc Ⅱ could serve as a supplemental parameter in diagnosing RA and together with anti—dc Ⅱ may help evaluate the disease activity.
毕业论文 【Key words】 Rheumatoid arthritis; Anti—type Ⅱ collagen antibody; Enzyme—linked immunosorbent assay; C—reactive protein。
抗Ⅱ型胶原抗体(antibodies to type Ⅱ collagen)与类风湿关节炎(RA)病情活动性、严重性的关系仍有争论。本参照Fujii等［1］提出的实验条件检测179例RA患者、171例其他风湿病和118名正常人血清的抗Ⅱ型胶原抗体，探讨其在RA中的临床意义。结果报告如下。
1 资料与方法。
1.1 一般资料。
1.1.1 病人组：为1994年9月至1999年3月在汕头大学医学院第一附属风湿科住院、门诊、随访的RA患者，共179例，全部符合1987年美国风湿病协会(ARA)的RA分类标准［2］。其中男性53例，女性126例，年龄17～76岁，平均46.3岁。其中病程1年之内，X线未出现明显骨质破坏者(以下简称早期病例)30例。
1.1.2 对照组：共289例，分为两组：一组为同期在汕头大学医学院第一附属医院风湿科门诊或住院的非RA的其他风湿性疾病患者171例；另一组为正常对照组，共118名。
参照Fujii等［1］的方法。
1.2.1 微量反应板的包被及封闭：正常羊血清于62 ℃加热20 min，加入固体Tris (0.05 mol/L)、NaCl (0.15 mol/L)和2 mol/L HCl，调pH值至8备用(BNGS)。天然Ⅱ型胶原在46 ℃水浴中加热20 min，即为变性胶原。
毕业论文 将天然Ⅱ型和变性Ⅱ型胶原分别溶解于0.05 mol/L的醋酸中，浓度为3 mg/ml。0.02 mol/L磷酸缓冲液(PB) pH 7.6稀释胶原溶液，使浓度为40 μg/ml，加入微量反应板孔，每孔100 μl，保鲜膜覆盖，4 ℃过夜。
在与待检血清标本进行温育之前，包被好的微量反应板用含0.05%吐温－20的生理盐水溶液洗涤3次，然后每孔加入100 μl BNGS，室温(24～28 ℃)下封闭30 min，洗涤液洗涤3次。
1.2.2 检测：BNGS稀释待检及阳性对照、阴性对照血清，转入微量反应板的微孔中，设二孔平行，每孔100 μl，同时设空白对照。室温温育2 h，生理盐水—吐温溶液洗涤3次。含25%BNGS的0.1 mol/L TBS pH 8.0溶液稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG，每反应 孔加入100 μl，室温温育2 h，洗涤。将联苯二胺和过氧化氢溶解于柠檬酸—磷酸缓冲液pH 5.0中，使各自浓度分别为0.05%和0.017%，加入反应孔，每孔100 μl，37 ℃温育30 min后每孔加入终止液1.25 mol/L硫酸50 μl终止反应，酶标分光光度计492 nm处测吸光度(A)值。
1.2.3 结果判断：以正常血清的平均A值加3个标准差作为正常值上限，待检血清A值超过者即被认为是阳性。
1.3 统计学处理。
计量资料数据采用t检验，计数资料数据采用χ2检验。
毕业论文 2 结果。
2.1 ELISA工作浓度的选择：为便于比较，选择工作浓度时以天然Ⅱ型胶原作为包被抗原，测定血清抗天然Ⅱ型胶原抗体水平。
参照［3］的方法进行。结果表明，Ⅱ型胶原包被液浓度以40 μg/ml，第二抗体辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG稀释度以1∶400，血清以1∶40稀释为最佳。
2.2 RA患者及对照组血清抗Ⅱ型胶原抗体检测结果：179例RA患者中，抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性者40例，阳性率22.3%，显著高于健康人和疾病对照组(3.5%和2.5%)(P＜0.05)；抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性者66例，阳性率36.9%，与正常对照组(2.5%)相比差异有极显著性(P＜0.000 1)，与其他风湿病(31.6%)差异不大。30例早期RA患者抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性9例，阳性率为30.0%。
抗天然Ⅱ型胶原抗体对RA诊断的敏感性为22.3%，特异性为96.9%，抗变性Ⅱ型胶原抗体对RA诊断的敏感性为36.9%，特异性为80.3%。
2.3 抗Ⅱ型胶原抗体与RA病情的关系：抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性患者RF阳性率高于阴性组(79.5%对61.8%，P＝0.041)，病情活动评分较高(8.5±9.5对6.6±1.5，P＝0.027)。抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性RA患者血清CRP平均水平较阴性组高(24.8%对19.6%，P＝0.003)。晨僵时间、压痛关节数、肿胀关节数、干燥综合征并发率、类风湿结节的发生率、功能分级二组间无统计学差异。IgG、IgM、IgA、γ—球蛋白，ESR水平、ANA阳性率及滴度、放射学病情进展及使用SAARDs的比例等方面在阳性组与阴性组无差异。抗变性Ⅱ型胶原抗体阳性的早期RA患者ESR、CRP水平较阴性组增高(P＜0.05)。
毕业论文 27例抗天然Ⅱ型胶原抗体阳性RA患者抗变性Ⅱ型胶原抗体同时阳性。本组病人RF检出率高于其他RA患者(P＜0.05)。CRP水平也较高(19.6±17.5对16.8±16.0，P＝0.007)。
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