黄连素和牛磺酸对胰岛素抵抗大鼠脂肪组织PAIlmRNA表达的影响

作者：赵晓华 李兴 李丽 崔琳琳。

【摘要】 目的：观察黄连素与牛磺酸对胰岛素抵抗(IR)大鼠的协同治疗作用。方法：SD雄性人鼠，按体重随机分为正常组和造模组，造模组大鼠饲以特殊高脂饲料30 d，造成胰岛素抵抗动物模型；以二甲双胍为对照，经黄连素和牛磺酸分别及联合治疗30 d后，取血检测血糖、胰岛素、血脂等指标，计算(IR)敏感指数。运用RTPCR技术测定大网膜脂肪组织PAI1mRNA的表达。结果：采用特殊高脂饲料可以成功诱导胰岛素抵抗动物模型；黄连素和牛磺酸可分别提高胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感指数，降低TG，TC，LDLC，升高HDLC(P＜0.05)，下调脂肪组织PAI1mRNA的表达；黄连素和牛磺酸的协同作用优于单独作用。结论：黄连素与牛磺酸协同具有降糖、降脂、提高胰岛素敏感性作用，阻断PAI1mRNA的过度表达的综合效应。

【关键词】 胰岛素抵抗 黄连素 牛磺酸 动物模型 Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制物。

Abstract Objective：To observe the effects of berberine and taurine on PAI1mRNA expression in epiploon adipose tissue of high fat rats model of insulin resistance(IR).Methods：SD rats were divided into normal and model groups at random by weight.Model groups were fed with high fat diet for 30 days firstly，screened the rats whose ISI decreased as model rats and treated with berberine and taurine respectively and combinedly for 30 dyas.After treatment，using RTPCR to PAI1mRNA from adipose tissue，the products were obtained，once its seqence was verified，semiquantitative RTPCR employed to study its expressions in adipose tissues of rats with different groups.The fasting plasma glucose，insulin，TG，TC and HDLC were performed in each groups.ISI was calculated.Results：The IR model rats were induced by high fat diet.The berberine and taurine group and combine group could significantly increase insulin sensitivity (P＜0.05)，decrease the weight(P＜0.05)，and decrease the expression of PAI1mRNA (P＜0.05) in model rats.Meanwhile TG，TC，LDLC decreased and HDLC increased.The parameters mentioned above in combine group was better than other groups.Conclusion：Application of combining berberine and taurine is effective in increasing insulin sensitivity IR in rats induced by highfat diet and decreasing the expression of PAI1mRNA in adipose tissues.It had significant effect on changing the total effect of insulin resistance.

Key words insulin resistance；berberine；taurine；rats；PAI1mRNA。

胰岛素抵抗(IR)是多种代谢相关疾病的共同土壤，对胰岛素抵抗机制探讨以及早期干预是近年来医学界研究热点［1］，脂肪组织作为新的内分泌器官与ER关系密切［2］。本实验通过经循证医学证实有明确改善IR的药物二甲双胍做标准对照观察黄连素和牛磺酸联合使用对IR大鼠脂肪细胞因子PAI1mRNA表达的影响，以探讨二者对IR的作用。

1 资料与方法。

1.1 动物。

清洁级SD大鼠60只，雄性，180～200 g，山西医科大学实验动物中心提供。

1.2 药物与制备。

二甲双胍、盐酸黄连素：使用前由医科大学第二临床医院制剂室配制为9 g/L灭菌混悬液，制剂置于4℃冰箱保存。牛磺酸：按3％比例混于高脂饲料给药。

1.3 主要试剂与仪器。

总RNA提取试剂，琼脂糖凝胶，游离脂肪酸试剂盒，自动核酸蛋白定量仪，PCR仪器，GDS8000凝胶成像分析仪，GS800光密度扫描仪。

1.4 造模方法及实验分组。

按SD雄性大鼠60只，适应性喂养1周后，按体重随机分为正常组(8只)和造模组，造模组采用特殊高脂饲料［3］，脂肪热比为59％，其中猪油占39％，蛋白质热比为21％，碳水化和物热比为20％，饲养30 d后，测空腹血糖和空腹胰岛素，计算胰岛素的敏感指数［4］；根据正常组ISI数值的均数加2倍标准差的值作为标准，小于该值的为造模成功者，共40只，其余剔除。成模大鼠按体重随机分层分为：模型组、二甲双胍组、黄连素组、牛磺酸组、黄连素加牛磺酸组，二甲双胍、黄连素均按156 mg·kg－1·d－1体重剂量制剂灌胃，牛磺酸混于饲料给药(在高脂饲料基础上添加3％牛磺酸)。正常组和模型空白组每日按15 mL·kg－1·d－1剂量灌服蒸馏水。各组均于每日8：00～9：00固定时间灌胃。

1.5 观测指标。

大鼠眼内眦静脉窦取血筛选造模成功大鼠，称重。连续干预1个月后，禁食12 h，动物称重，清醒状态颈动脉采血离心取上清测指标空腹血糖、胰岛素、TC、TG、HDLC、LDLC。IAI数值按李光伟等［5］的方法计算：IAI＝l/(FPG×FINS)的自然对数。

1.6 RTPCR方法。

检测大网膜脂肪组织PAI1表达。

1.6.1 总RNA提取。

每只大鼠于取血后使用DEPC水处理的灭菌器械迅速剖腹取大网膜脂肪组织，立即置灭菌EP管，标记后入液氮冷冻，深低温冰箱保存备用，对大网膜脂肪组织总RNA提取，据紫外分光光度计测定标本RNA吸光度，OD260/OD280值1.8～2.0进行纯度鉴定。

SD大鼠PAI1 cDNA序列与内对照磷酸丙糖脱氢酶(GADPH) cDNA序列通过美国国家生物医学中心(NCBI)检索获得。引物序列由Primer 5.0软件设计。

PAI1引物：5′ATGAGATCAGTACTGCGGACGCCATCTTTG3′，5′GCACGCAGATGGTGCTACCATCAGACTTGT3′，GAPDH引物：5′GGGTGGTCCAGTATTTCTTA3，5′CTGTGGCATGATGTCCTT3。

1.6.2 逆转录及PCR反应。

各取RNA 5 μL进行逆转录，逆转录产物cDNA在PCR仪上进行扩增反应，反应条件：95℃预变性2 min，以94℃变性1 min、56℃退火1 min、72℃ 50 s共进行30个循环，72℃延伸10 min。

1.6.3 2％琼脂糖凝胶电泳。

PCR反应后，取5 μL PCR产物加1 μL电泳缓冲液进行2％琼脂糖凝胶电泳，100 V电压电泳30 min。

1.6.4 扫描成像分析。

对电泳结果用凝胶成像系统照相。用Blandleader3.0图像处理软件的光密度扫描仪扫描测定灰度值，最终对条带进行A值测定，以PAI1与内参照GAPDH的A值之比值来表示PAI1表达量。

1.7 统计学方法。

全部计量资料取±s；ISI数据先经过变量变换再进行统计描述与分析；两组均数比较用t检验；多组间比较用单因素方差分析，两两比较用q检验：多个实验组与对照组比较用Dunnettt检验。以P＜0.05为统计学有显著意义，所有数据用SPSS10.0软件处理。