绣球菌富硒发酵工艺的研究
摘 要硒是人体必微量元素。
该实验研究了富硒程硒对绣球菌生长影响以邻苯二胺显色剂采用紫外分光光法5℃下用甲苯作萃取剂萃取硒和邻苯二胺作用产物波长335下测定其吸光。
实验主要考察了绣球菌（荷仙菇）琼脂固态培养基对硒耐受能力以及其液态培养程生物量以及硒富集率动态变化。
结表明培养基硒浓0gL以下能够促进菌丝生长高0gL硒对菌丝生长有抑制作用适硒浓0gL富硒率307%。
关键词绣球菌；富硒；发酵图分类 66 献标识码 编 007773（08）06030brl l r l l r gr l rr l rg rg brb r r b l r vlg 335 b V rr lr l gr l g l r l lq lr r rl lr l r bl 0gL l r gr lgr 0gL l ll gr b r l 0gL l r 307%K rrr；；r绣球菌[rr（l）r]又名荷仙菇、绣球蕈、椰菜菌等属担子菌亚门、异隔担子菌纲、无隔担子菌亚纲、非褶孔菌目、绣球菌科、绣球菌属[]。
绣球菌含有多种人体必营养成分如蛋白质、多种维生素、多种氨基酸、碳水化合物及膳食纤维等特别是其子实体主要活性成分β葡聚糖对人体具有补肾、润肺、健脑、抗疲劳等多种功能常食用能够提高人体免疫力促进人体造血机制并且对癌症、肿瘤等疾病预防和改善有非常有益作用具有丰富营养和药用价值。
硒是人体重要微量元素硒介入某些致癌物質代谢抑制致癌物产生；增强了体抑癌物产生形成克制了癌细胞分裂环境。
定量硒摄入会对人体抗癌防癌有定功效。
食用菌富集功能可以把硒从无机状态化有机状态增强人体对硒吸收研究发现食用菌所富集有机状态下硒具有很稳定性而且易吸收效。
材与仪器 供试菌种 绣球菌品种荷仙菇由上海荷仙菇生物科技股份有限公司提供。
试剂和培养基 酵母粉（青岛青药生物工程有限公司）；蛋白胨（青岛青药生物工程有限公司）；豆粉（陕西森弗天然制品有限公司）；K（青岛青药生物工程有限公司）；亚硒酸钠（青岛青药生物工程有限公司）；邻苯二胺（山东佰仟化工有限公司）；浓硝酸（淄博库仑分析仪器有限公司）；高氯酸（山东佰仟化工有限公司）；盐酸（6lL青岛青药生物工程有限公司）；氢氧化钠（青岛青药生物工程有限公司）；5% 溶液、gL硒标准溶液、%邻苯二胺溶液（现配现用）、甲苯；绣球菌固体培养基（玉米粉5%麸皮粉05%酵母0%蛋白胨0%豆粉0%K 0%琼脂粉%55）；绣球菌液体培养基（玉米粉5%麸皮粉05%酵母0%蛋白胨0%豆粉0%K 0%55）；培养基。
3 主要仪器 生化培养箱（广东医疗机械厂）；双层恒温摇床（上海福玛实验设备有限公司）；医用离心机（长沙仪器仪表有限公司）；755紫外可见光分光光计（上海佑科仪器仪表有限公司）；超净工作台（苏洁净化）；L3750高压蒸汽灭菌器（三洋电机株式会社）。
实验方法 菌种活化 用打孔器将绣球菌斜面母种接入绣球菌培养基5℃下活化培养0得活化菌种。
固体培养 按表配制含不浓硒绣球菌固体培养基用打孔器将活化0%绣球菌接种到培养基5℃恒温培养0。
每平行3重复。
3 液体菌种制备 用打孔器取0绣球菌菌块接种到盛有00L种子培养液50L三角瓶5℃摇床0r震荡培养0得到液体菌种。
液体培养 按表配制含不浓硒绣球菌液体培养基以0%接种量把种子液接到不硒浓培养基5℃0r培养5～0培养结束测定菌丝生物量和硒含量、富硒率。
5 测试项目5 菌丝生物量测定 （）液体发酵菌丝生物量测定发酵液5000r离心上清液菌丝体用离子水洗涤5次离心置烘箱60℃烘至衡重。
（）固体培养菌丝生物量测定培养基表面刮取菌丝置烘箱60℃烘至衡重。
5 硒标准曲线绘制 首先用gL硒标准溶液配制浓μgL硒标准工作溶液。
分别取0356L硒标准工作溶液50L比色管分别加蒸馏水定容至5L再加入5% 溶液L摇匀。
用0 或乙酸调节溶液至～5再黑暗处加入%邻苯二胺溶液（现配现用）L摇匀黑暗处静置反应。
反应所得溶液加入甲苯0L剧烈振荡混匀静置5再335处测定溶液吸光以不含硒水溶液作空白对照。
以吸光335纵坐标含硒（μg）横坐标绘制硒标准曲线。
53 样品消化和测定 邻苯二胺紫外分光光法准确称取0lg样品50L烧杯加入硝酸—高氯酸（∶vv）混合酸5L盖上表面皿冷消化夜。
次日通风橱用可调档电炉加热消化样品先用火加热避免消化液酸与多有机物剧烈反应而飞溅出待烧杯有机物基溶调高火加热使那些低温下不能被氧化分有机物彻底分。
稍冷烧杯加入6 l溶液L再加热至消化原即可（冒白烟立即取下）。
用蒸馏水冲洗表面皿底部和烧杯壁所得消化液滤定容至5L。
再所得溶液加入5% L用l0 调节至～5。
反应溶液加甲苯0L萃取剧烈振荡使溶液混匀静置5再335处测定萃取液吸光。
5 富硒率计算 计算公式如下富硒率[富硒菌丝体硒含量（μgg）空白菌丝体硒含量（μgg）]×富硒菌丝体干重（g50L）培养基硒含量（g50L）3 结与分析3 硒标准曲线 详见图。
3 菌丝体生物量变化 从图可知当培养基加亚硒酸钠浓低0gL硒元素可以促进绣球菌菌丝生长0gL达到高值006g；超0gL亚硒酸钠浓对其菌丝体生长有显著被压制现象从而可以推出绣球菌菌丝硒耐受力0gL。
从图3可知液体培养菌丝体生长比较缓慢但是可以看出0～0gL浓下其菌丝生长呈增长趋势。
33 菌丝体富硒量变化 由图可知固体培养候不加硒对照组含硒量9gkg（干重）当培养基含量0gL菌丝体硒含量达到了高7gkg；当培养基硒浓0gL候菌丝体硒含量087gkg而且随着硒浓增加菌丝体硒元素含量也随降低。
从图5可知液体培养候当培养基含量0gL绣球菌菌丝体富硒量达到高值55gkg。
3 富硒率 结合图6、7可以看出菌丝体富硒率0gL307%当培养基硒浓高0gL菌丝体生长受到抑制与不加硒元素培养基生长绣球菌菌丝体相比富硒能力也受到影响。
讨论作人体必不可少微量元素硒元素是组成机体磷脂氧化氢谷胱甘肽氧化物酶和红细胞谷胱甘肽氧化物酶必不可少部分其主要功能是参与酶合成和保护细胞膜功能和结构不受到干扰和氧化除外硒元素对人体说还有很多不可少生理功能对保持机体正常生命活动有重义。
目前对绣球菌富集硒元素研究尚没有太多报道对其他食用菌富硒研究报道常见就是对富硒灵芝研究除了对食用菌富硒研究外还有对酵母、茶叶等富硒研究。
研究以繡球菌研究对象对其进行了固体培养和液体培养富集硒元素研究。
硒元素对绣球菌菌丝体生长有着双重作用即促进生长作用和抑制生长作用适宜低浓值硒元素有助绣球菌菌丝体生长当硒浓值某临界值就会对绣球菌菌丝体生长产生抑制作用。
实验加入亚硒酸钠亚硒酸钠作无机硒被菌丝体吸收机体化有机状态下硒参加机体酶化加强绣球菌菌丝体新陈代谢使得体蛋白质量增加与硒元素结合。
实验研究表明绣球菌菌丝生长耐受浓硒浓0gL候浓相对灵芝富硒能力说绣球菌硒元素耐受能力相对较低。
当硒浓含量超0gL相对正常培养菌丝体说其富硒能力受到了抑制。
次实验程用到了绣球菌生长佳培养基但绣球菌菌丝体生长速比较慢。
由其培养基对液体培养观察有妨碍作用其液体培养候采用了培养基以便观察绣球菌菌丝生长状态。
消化候值问题要5～0酸性条件下用甲苯作萃取剂萃取邻苯二胺与亚硒酸钠发生化学反应生成络合物所以对实验把握由关键。
调整如用0调值添加量会比较多实验发现先加入35g颗粒（下5页）（上接5页）然再进行调节。
这样会减少滴定工作工作量减误差使溶液量基保持致。
该实验精准性影响因素还有外金属离子影响如铜、铁等这种情况只要加掩蔽剂即可消除研究表明没有加样品其吸光值比加了高证明确实对铁等金属干扰离子有屏蔽作用。
但因处理样品用试剂环境有所差异加入掩蔽剂量就会有差异要根据实际情况定加入量。
5 结论实验研究证明亚硒酸钠浓对绣球菌生长有双重作用0gL亚硒酸钠浓以下对绣球菌生长有促进作用超这值就会有碍其正常生长。
绣球菌对硒元素具有有效富集能力确定了培养基佳硒添加浓0gL。
参考献[]裘维蕃余永年菌物学全[]北京科学出版社998[]贾培培卢伟东郭立忠等绣球菌驯化栽培[]食用菌学报00033336[3]刘成荣冯旭平绣球菌深层发酵工艺条件研究[]莆田学院学报008（5）677[]rvR rl lrl rl l r0057（&）55[5]r r l lv gl l r b lbl B glG []Blgl& rl Bll0058（）335[6]k Kb lBl rr rk rg v k br R[]rl rl065（）35[7]姚莉段玉峰微量元硒与人体健康[]国食品与营养00（7）335[8]陈亮李桃元素硒与人体健康[]微量元素与健康研究00（3）37[9]王洛叔雷道年吴炳辅微量元素对黄曲霉素B诱发鼠肝癌影响[]国病理学杂志990（）3739[0]全衛丰何静霞汪洁等不灵芝菌株富硒能力比较研究[]食用菌0（）869[]汪洁全卫丰刘广建等硒化灵芝液体发酵初步研究[]食用菌00（）7[]凌宏通宋斌林群英等富硒食用菌研究进展[]微生物学杂志008（）7883[3]陈宏伟陈莉朱蕴兰虫草液体深层发酵富硒研究[]食用菌005（5）360[]徐暄紫外分光光法测定樱桃番茄微量元素硒[]安徽农业科学009（）83[5]许峰球盖菇富硒液体培养条件优化及抗氧化能力初步研究[]泰安山东农业学006（责编张宏民）