祛疣洗剂提取纯化工艺研究
作者：鞠建明 钱大玮 朱玲英 沈红 李英。
【摘要】 ：目的研究祛疣洗剂制备工艺，优选最佳提取、纯化工艺条件。方法以羟基红花黄色素A含量、含固量为检测指标，用正交实验考察了3种因素（加水量、煎煮时间、煎煮次数）对其水煎煮工艺的影响；然后比较了不同的醇沉浓度的去杂效果。结果祛疣洗剂最佳水提工艺条件为加12倍量水，煎煮2次，1 h/次；去杂工艺以60%醇沉为佳。结论制备工艺合理。
【关键词】 祛疣洗剂 高效液相色谱 正交实验 醇沉 羟基红花。
黄色素A祛疣洗剂是江苏省中医药研究院临床经验方，疗效确切。该方由狼毒、红花、板蓝根等6味药组成，具有清热解毒，杀虫除湿之功，用于治疗各种赘疣。红花为本方中主要药味，主要活性成分为羟基红花黄色素A。为了确保该制剂制备工艺的合理性，我们以羟基红花黄色素A为主要考察指标，对处方的水煎煮工艺和纯化工艺进行了优选，确定了合理的制备工艺。
1 仪器与试药。
1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪（Alliance2695四元泵及自动进样系统，996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站）；Millipore Milli—Q纯水器；METTLER万分之一及百万分之一电子天平。
1.2 试药 羟基红花黄色素A对照品（批号:11637—200502），由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；水为重蒸水；甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果。
2.1.1 正交实验设计［1］ 根据预实验，对影响水提取工艺的主要因素（加水量、提取时间、提取次数）按4因素3水平进行L9（34 ）正交实验。各因素水平安排见表1。 表1 正交实验因素水平。
2.1.2 样品制备 按处方比例称取药材145 g，分别按正交实验表各行所列条件煎煮，滤过，合并滤液，减压浓缩（65℃）至2 000 ml。
2.1.3 含量测定。
含固量测定：精密量取样品液25 ml，水浴蒸干，105℃烘3 h，取出置干燥器内冷却30 min，迅速称重。结果见表2。
羟基红花黄色素A的含量测定：①色谱条件［2，3］：色谱柱为Alltima C18（4.6 mm×250 mm ，5 μm）；流动相为甲醇—乙腈—0.5%磷酸水（26∶2∶72）；流速1.0 ml·min—1；检测波长400 nm；柱温35℃。在此条件下羟基红花黄色素A与相邻峰达到基线分离（见图1）。②对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A对照品1.866 mg置于10 ml量瓶中，用25%甲醇溶解并定容至刻度，即得每毫升含0.186 6 mg的对照品溶液。③供试品溶液的制备：取正交实验样品液适量，离心，上清液过0.45 μm的微孔滤膜，即得供试品溶液。④标准曲线的制备：精密吸取羟基红花黄色素A对照品溶液1，5，10，15，20，25 μl，注入液相色谱仪，测定其峰面积，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程：Y=2.55×106X—2.20×105，r=0.999 8。⑤精密度实验：精密吸取对照品溶液10 μl，连续进样6次，峰面积的RSD为0.4%。⑥供试品溶液的含量测定：精密吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，依法测定，计算含量。结果见表2。
2.1.4 方差分析结果 将1～9号实验综合评分进行方差分析，结果见表3。表3 方差分析结果。
2.1.5 正交实验优选结果 由直观分析可知，极差(R)最大的为C因素,其次分别为B因素、A因素。说明对羟基红花黄色素A及浸出物含量影响最大的为煎煮次数，其次分别为煎煮时间、加水量，最佳组合为A3B2C2；从方差分析结果可知：A，B，C 3因素均无统计学意义（P0.05），选任何水平都可以，所以以极差分析结果A3B2C2作为最佳提取工艺，即加12倍量水，煎煮2次，煎煮1 h/次。