龙血竭总黄酮纯化工艺研究
周云龙 彭霜 李江 李争艳 余晓玲 陈凌云摘要目 建立龙血竭总黄酮纯化工艺。
方法 以龙血素、龙血素B吸附率和吸率评价指标采用孔树脂纯化龙血竭总黄酮确定佳纯化工艺。
结 孔树脂纯化龙血竭总黄酮佳工艺选择0孔树脂用03%溶液溶龙血竭乙酸乙酯提取物上样质量浓 gL上样量 BV上样体积流量0 BV依次用纯化水洗脱杂质至流出液呈性止再用80%乙醇5 BV洗脱。
得到龙血竭总黄酮含量以龙血素和龙血素B计比药材含量提高了3倍。
关键词龙血竭;总黄酮;孔树脂;纯化工艺图分类R8 献标识码 编005530（09）0800830603969005530090807 开放科学（）标识码（）br bv bl r r r l lv r rg bl r r r r Lrr Lrr B r vl r r rr r r r l lv rg bl b r r Rl l r r r l lv r rg bl b rr r r ll 0 rr r l l xr rg bl lv 03% l r l gL lg BV lg vl 0 BV r r l r r l l rl l 80% l 5 BV b l lv rg bl Lrr Lrr B r b 3 r r l 0 rr r b r r l lv r rg bl r bl rlblKr rg bl; l lv; rr r; r r龍血竭是合科龙血树属植物剑叶龙血树r （Lr） 树脂主要含有黄酮类、皂苷类、酚类、有机酸、酯类和挥发油等成分具有活血散瘀、定痛止血、敛疮生肌功效用跌打损伤、瘀血作痛、气血凝滞、外伤出血、脓疮久不收口。
现代研究表明龙血竭具有抗炎、镇痛活血、止血抗细菌、真菌改变血液流变学等药理作用[5]。
其黄酮类成分是其主要有效成分龙血竭黄酮类化合物主要有二氢耳酮、耳酮、黄烷、二氢黄酮和黄酮等[6]。
有研究表明龙血素、B、及7羟基"甲氧基黄烷、"7二羟基高异黄烷具有体外活血化瘀药理活性[]。
陈素等[3]研究表明龙血竭总黄酮是龙血竭抗炎镇痛主要有效部位。
目前龙血竭总黄酮含量多采用比色法进行测定但由龙血竭身呈红色比色法测定程会对显色结造成定影响导致测定结不准确故研究采用L测定总黄酮龙血素、B通这种成分含量表征龙血竭总黄酮含量并以两者吸附率和吸率指标进行纯化工艺研究。
因研究考察孔吸附树脂对龙血竭总黄酮龙血素、龙血素B静态、动态吸附性能筛选优纯化工艺续相关开发和综合利用提供依据。
仪器与试药gL 00高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）0B型电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）型电子天平（奥豪斯仪器有限公司）RV0型旋蒸发仪（德国K集团）Z8型恒温振荡器（常州国华电器有限公司）500型高速药粉碎机（温岭市林机械有限公司）。
龙血竭饮片昆明市医医院提供;龙血素对照品（批07360093）、龙血素B对照品（批5580006）国食品药品检定研究院;孔树脂B8、00、00B、00、500、0、K9聚酰胺安徽三星树脂科技有限公司;乙腈（色谱纯）rk股份有限公司;其余试剂分析纯。
方法与结 指标成分含量测定 对照品溶液制备分别取龙血素、龙血素B对照品适量精密称定加甲醇溶制成分别含龙血素、B含量分别86、 μgL混合对照品溶液。
龙血竭飲片供试品溶液制备取龙血竭饮片用万能粉碎机进行粉碎80目筛即得龙血竭饮片粉末备用。
取龙血竭饮片粉末约0 g精密称定用甲醇溶并定容至5 L摇匀用0 μ微孔滤膜滤取续滤液即得。
3 龙血竭总黄酮供试品溶液制备取实验室制备龙血竭总黄酮粉末约0 g精密称定用甲醇使溶并定容至5 L摇匀用0 μ微孔滤膜滤取续滤液即得。
检测波长选择00～00 波长围对龙血素、B对照品溶液进行扫描从光谱图可以看出龙血素、B波长75 处有吸收故选择75 作龙血素、B检测波长。
5 色谱条件及系统适用性试验色谱柱K 8（6 ×50 5 ?）;流动相乙腈05%冰醋酸（6∶7）;流速 L;柱温35 ℃;检测波长75 ;进样量0 ?L。
理论塔板数以龙血素计算不低6000。
取龙血素、B对照品溶液及龙血竭饮片供试品溶液各0 ?L入液相色谱仪进行测定。
色谱图见图。
其龙血素、B理论塔板数5 000分离>0拖尾因子满足要。
6 线性关系考察取“”项下对照品溶液分别精密吸取、5、0、5、0、5 μL入液相色谱仪按“5”项下色谱条件测定峰面积以峰面积纵坐标进样量横坐标绘制标准曲线计算回归方程。
结龙血素回归方程37359X605 7（r0999 9）表明0086 ～6 ?g围龙血素峰面积与进样量有良线性关系;龙血素B回归方程337X6（r0999 9）表明00 ～03 ?g围龙血素B峰面积与进样量线性关系良。
7 稳定性试验取龙血素、B对照品及供试品适量依法制备对照品溶液和供试品溶液0、、8、、6 分别吸取0 μL入液相色谱仪测定峰面积。