T细胞急性淋巴细胞白血病免疫表型分析

作者：陈丽娟，李建勇，吴雨洁，杨慧，钱思轩，吴汉新，陆化，徐卫，盛瑞兰。

【摘要】 本研究探讨T细胞急性淋巴细胞白血病（TALL）免疫表型特点。应用一组系列相关单克隆抗体和CD45/SSC设门的三色流式细胞术对140例TALL进行免疫表型检测。结果显示，白血病细胞表面T系抗原表达依次为CD7CD2CD3CD5，近20%患者CD10表达阳性。140例患者中12例带有B系抗原标记，阳性率达8.57%；136例中31例带有髓系抗原标记，阳性率达22.79%，所有病例均无CD14表达。干/祖细胞标记CD34表达阳性率31.06%，41例CD34＋ TALL髓系抗原表达15例，阳性率36.59%，91例CD34— TALL髓系抗原表达14例，阳性率15.38％, 二者具有统计学差异（p0.01）。儿童TALL CD3表达高于成人（p0.05），而CD33表达明显低于成人（p0.01） 结论： 免疫表型分析是诊断TALL的重要手段，TALL免疫表型具有异质性。

【关键词】 急性白血病。

Immunophenotyping Characteristics of Tcell Acute Lymphoblastic Leukemia。

Abstract The objective of this study was to investigate the immunophenotypic characteristics of Tcell acute lymphoblastic leukemia (TALL). Immunophenotyping was performed in 140 TALL patients by flow cytometry using a panel of monoclonal antibodies and CD45/SSC gating. The results showed that the Tlineageassociated antigen expressions were CD7CD2CD3CD5 successively. The positive rate of CD10 was 19.42% in patients. Among 140 cases of TALL, 12 (8.57%) was accompanied by Blineage associated antigen expression. Myeloid antigen expression was identified in 31 out of 136 cases (22.79%). None of them expressed CD14 antigen. The positive rate of CD34 was 31.06%. The positive rate of myeloid antigen expression in CD34＋ TALL (36.58%) was significantly higher than that in CD34— TALL (15.38%) (p0.01). The expression of CD3 in child TALL was higher than that in adult TALL, whereas the expression of CD33 in children was lower than that in adults. It is concluded that immunophenotyping is an important tool for diagnosis of TALL. Immunophenotypic characteristics of TALL is heterogeneous.

Key words Tcell acute lymphoblastic leukemia; acute leukemia; immunophenotyping。

急性淋巴细胞白血病（ALL）是一组免疫表型高度异质性的淋巴系统恶性克隆性疾病。根据其免疫表型分为B细胞型，T细胞型及T/B混合型，其中T细胞型ALL(TALL)占ALL的15%—25％，具有不同于B系ALL的独特的临床、免疫学、细胞遗传学和分子生物学特点。虽然近年来国外文献报道由于应用含有大剂量环磷酰胺及阿糖胞苷的化疗方案，TALL的预后有了较大改善，但仍有部分TALL疗效较差，即使大剂量化疗也不能达到完全缓解， 因此TALL疗效的异质性促使我们对其特征进行进一步研究。本研究通过分析既往诊断TALL的140例免疫表型，总结其免疫表型特点。

材料和方法。

临床资料。

1996年6月—2006年6月，经细胞形态学、免疫分型诊断的TALL患者140例，其中男94例，女47例，男∶女=2∶1，中位年龄15.5(1—67)岁。成人78例，男58例，女20例，男∶女=2.9∶1，年龄15—67岁；儿童62例，男35例，女27例, 男∶女=1.3∶1，年龄1—14岁。

用骨髓涂片进行常规细胞形态学及细胞化学检查，按照FAB分类标准骨髓中原始淋巴细胞≥30%，诊断为急性淋巴细胞白血病。

免疫表型分析。

取肝素抗凝的新鲜骨髓或外周血标本，调整细胞数至(0.5—1)×106/ml，用三色荧光(三种荧光素为FITC, PE, PECy5)直接免疫标记法检测。以CD45/SSC设门(gating)，每管均加人PECy5CD45，共检测14种胞膜抗原：T淋巴细胞系列(淋系)的CD2、CD3、CD5、CD7；B淋巴系列的CD19、CD20、CD22；T、B均表达抗原CD10；髓细胞系列(髓系)的CD13、CD14、CD33、CD42b、CD61；干细胞及祖细胞标记CD34。部分出现两系以上标记加做胞浆抗原cMPO、cCD79 和cCD3(所有单克隆抗体均购自法国Immunotech公司)。用流式细胞仪(BeckmanCoulter公司，Epics XL型，488 nm激发光源)检测，每管获取并分析10 000个细胞，采用Expo32 ADC分析软件分析。幼稚细胞抗原阳性标准：CD34和胞浆抗原≥10%；其它抗原≥20%［1］。

统计学方法。

计数资料比较用χ2检验，以p0.05为差异具有显著性意义。

结 果。

CD45/SSC双参数设门的检测。

采用CD45/SSC双参数设门方法能清楚地区分骨髓或外周血中的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、有核红细胞和幼稚细胞群。幼稚细胞的SSC值与正常淋巴细胞的SSC值相似或稍高，CD45的荧光强度与粒细胞荧光强度相似。

免疫表型特点。

14种胞膜抗原表达的阳性率见表1。白血病细胞表面T系抗原表达依次为CD7CD2CD3CD5，近20%患者CD10为阳性。140例患者中12例带有B系抗原标记，阳性率达8.57%；136例中31例带有髓系（My）标记，阳性率达22.79%，CD13表达高于CD33，所有病例均无CD14表达。干/祖细胞标记CD34表达阳性率31.06％，41例CD34＋ TALL髓系抗原表达15例，阳性率36.59%，91例CD34— TALL髓系抗原表达14例，阳性率15.38%，二者具有统计学差异（p0.01）。CD34＋ TALL中CD10表达10例，CD34— TALL中CD10表达16例，二者无统计学差异（p0.05），且无年龄相关性。对上述抗原不能确定为TALL的15例患者，予以cCD3、cMPO和cCD79 检测，以cMPO和cCD79 阴性，cCD3阳性明确诊断，其中10例CD3阴性，另有5例未检测到胞膜抗原CD3。

依据2001年WHO的积分系统评分标准,T系积分＞2分诊断为TALL［2］。在140例中，107例可确诊TALL，尚有33例不能明确诊断，均未检测到胞浆抗原。其中19例T系积分在1.5—2分，不伴有B系及髓系抗原表达。另有12例T系积分在2.5分以上，8例伴有B系胞膜抗原表达，大部分积分1，2例积分2分，但所有B系抗原均为弱表达，低于30%；8例伴有髓系抗原表达，积分均为1分；4例同时伴有B系及髓系标记。3例T系积分1.5分，T系抗原均强表达（60%），分别伴有弱表达（25%）的CD19、CD20和CD13抗原。

TALL免疫表型与年龄的关系。

儿童和成人胞膜抗原表达阳性率见表2。儿童TALL CD2、CD3、CD7和CD34的表达高于成人，而CD10、CD13和CD33较成人TALL低。CD3表达明显高于成人（p0.05），而CD33表达明显低于成人（p0.01），其余表面抗原表达二者均无统计学差异。