扶正方药对复发性念珠菌性阴道炎小鼠模型的抗真菌作用研究
【摘要】 目的观察扶正方药对复发性念珠菌性阴道炎小鼠模型的抗真菌作用。方法对小鼠进行白色念珠菌初次感染，待小鼠自行康复后进行再次感染，建立复发性念珠菌性阴道炎模型，观察扶正方药对动物模型抗真菌治疗的干预作用。结果扶正方药组病原体转阴率100%,与常规治疗组病原体转阴率(66.7%)相比较，存在显著性差异(P0.05)。结论扶正方药可有效提高复发性念珠菌性阴道炎小鼠模型的治愈率。
念珠菌性阴道炎(candidal vaginitis)是妇女常见的阴道黏膜真菌感染性疾病，以白色念珠菌为主要致病菌。近年来,该病发病率呈上升趋势,部分患者反复发作，转变为复发性念珠菌性阴道炎(recurrent vulvo vaginal cadidiasis)。目前对复发性念珠菌性阴道炎的预防、治疗效果不理想。本研究通过建立复发性念珠菌性阴道炎小鼠模型,探讨了扶正方药对其的抗真菌作用。
1 材料。
1.1 动物 清洁级，健康雌性ICR小鼠70只，鼠龄8～9周，体重（21±2）g，由河北医科大学实验动物中心提供。动物以标准饲料喂养，自然光线，自由饮食饮水。
1.2 药物 扶正方药煎液，处方由黄芪、党参、茯苓、苍术、山药各20g组成，取诸药加水共煎，共2次，合并煎液，浓缩、滤过，滤液加蒸馏水调至药物浓度为0.125 g生药/ml，4～8℃冰箱中保存备用。
1.3 菌液［1］ 取新传代白色念珠菌(临床株，由河北省中医院检验科从念珠菌性阴道炎患者中分离并鉴定)，接种于沙保氏液体培养基，37℃培养48 h，镜检证明念珠菌已产生假菌丝，将培养液2 000 r/min离心10 min，取沉淀加入适量PBS制成孢子液，血细胞记数仪进行孢子计数，调整菌液浓度为5.0×106个孢子/ml，4～8℃冰箱中保存备用。
1.4 试剂 苯甲酸雌二醇注射液，1 mg/ml，上海通用药业股份有限公司生产。伊曲康唑胶囊，100 mg/粒，西安杨森制药有限公司生产，临用前用蒸馏水配成浓度为0.25 mg/ml的混悬液。
2 方法。
2.1 白色念珠菌初次感染［2］将所有动物进行雌激素化处理，每只小鼠后腿皮下注射(sc)苯甲酸雌二醇注射液(按4 mg/kg体重给予),1次/2 d，共3次。于雌激素化处理第7天（接种日），将真菌悬液10 μl(即白色念珠菌孢子接种量为5×104个)注入小鼠阴道深处，每只小鼠接种后倒置5 min防止菌液溢出，以感染后第2天阴道分泌物镜检和培养检查均有假菌丝和芽生孢子的白色念珠菌，证实初次感染成功。
2.2 复发性念珠菌性阴道炎模型建立［3～5］初次感染实验结束后第5周末，用无菌棉签蘸取小鼠阴道分泌物，逐只做涂片检查, 镜检阴性说明动物初次感染后恢复健康。选取镜检阴性小鼠36只随机分为模型对照组、常规治疗组和扶正方药组，每组动物12只。3组动物均于分组后第13天进行接种1次（方法同初次感染）。常规治疗组于接种当日开始灌胃伊曲康唑（按2 mg/kg体重，相当于临床常用剂量的6倍）；模型对照组于接种当日开始灌胃以相应容量的生理盐水；两组灌胃均1次/d，连续3 d。扶正方药组于分组当日开始灌胃扶正方药煎液（按10g生药/kg体重，相当于临床等效剂量的6倍），1次/d，连续15 d。
2.3 指标观测［6］ 于末次灌胃后第1天，各组小鼠行阴道涂片检查，观察白色念珠菌感染情况，计算病原体转阴率，根据白色念珠菌转阴率判断扶正方药对小鼠复发性念珠菌性阴道炎模型的影响。应用SPSS 12.0软件对数据进行统计分析，分析方法采用χ2检验。