高效液相色谱法测定云威灵药材中百里香酚的含量
【摘要】; 目的 建立云威灵药材中百里香酚的含量测定方法。方法 用高效液相色谱法，体积分数为95%的乙醇回流提取，色谱柱Symmetry C18，流动相乙腈—水 (体积比65∶35)，检测波长274 nm。结果 百里香酚在0.04～1.23 mg (r=0.9999)有良好的线性关系；平均回收率百里香酚99.02%(RSD 1.03%)，重复性百里香酚RSD 0.88%。结论 该方法可靠、便捷，可以作为控制云威灵药材质量的方法。
Abstract:Objective To establish a quantitative method for determining the content of thymol in Inula nervosa Wall. Method The sample was extracted with 95% ethanol,then analyzed on a C18 column using acetonitrile—water (65∶35) as mobile phase. The detection wavelength was set at 274 nm.Result The linear range of thymol was 0.04～1.23 mg (r=0.9999),and the average recovery was 99.02% (RSD 1.03%).Conclusion The method is reliable and rapid for quality control of Inula nervosa Wall.
Key words:Inula nervosa Wall；thymol；HPLC。
威灵仙是毛茛科植物威灵仙Clematis chinese Osbeck棉团铁线莲C.hexapetala Pall及东北铁线莲C.manshurica Rupr的干燥根及根茎，为祛风湿和止痛的常用中药［1］。长期以来其药材来源相当混乱，据考证，在全国有十余种植物均作威灵仙应用［2］。云南省的大部分地区，长期习用菊科旋覆花属植物显脉旋覆花（Inula nervosa Wall）作威灵仙入药。云南威灵仙又名铁脚威灵仙、黑威灵（《思茅中草药》），草威灵（《昆明民间常用草药》），小黑药、葳灵仙（《滇南本草》），黑根（《贵州民间药物》），铜脚威灵（《云南中草药选》）、威灵菊（《全国中草药汇编》），黑根药（四川），乌根草（广西）。其功用祛风湿，通经络，健胃消食，祛痰止咳。主治风湿骨痛，脚气水肿，感冒咳嗽，食滞腹胀噎膈，胃痛，高热，体虚多汗［3］。据文献报道，威灵仙中的主要成分百里香酚有较强的抑杀细菌、真菌的作用，且毒性低［2,4］。为有效地控制云威灵药材的质量,本文测定了不同产地和来源的样品，建立了用高效液相色谱法测定云威灵药材中百里香酚的方法。
1; 仪器与试药 ; 高效液相色谱仪:Waters 2690,Waters PAD 996紫外可见检测器、Precisa XS 125A型电子天平（瑞士产）。水为超纯水,乙腈为一级色谱纯,其他试剂均为分析纯。百里香酚(购于中国药品生物制品检定所 100508—200301)。药材经广东药学院中药鉴定教研室鉴定为菊科旋覆花属植物显脉旋覆花Inula nervosa Wall。
2; 方法与结果。
2.1; 色谱条件 ; 色谱柱Symmetry C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相乙腈—水(体积比65∶35)；检测波长274 nm；流速1 mL·min—1；理论板数按百里香酚峰计算不低于11 000。 ; 检测波长的选择：取百里香酚对照品1.0 mg至10 mL的容量瓶中，加体积分数为95%的乙醇至刻度使其溶解，配成溶液质量浓度为0.1 mg/mL的标准品溶液。取0.1 mg/mL的标准品溶液进行峰值检测，结果在274 nm有最大吸收峰，所以选274 nm作为检测波长。见图1。
Fig.1; Wavelength screen of thymol。
2.2; 线性关系的考察 ; 精密称取百里香酚对照品12.30 mg,置10 mL量瓶中,加体积分数为95%的乙醇溶解并至刻度,摇匀,精密量取上述溶液5 mL,置10 mL量瓶中,加体积分数为95%的乙醇至刻度,制成每1 mL含0.615 mg的百里香酚溶液。同理，依次从上次的溶液中取5 mL，至10 mL量瓶中，加体积分数为95%的乙醇至刻度,依次制成每1 mL分别含0.3075 mg，0.1538 mg，0.0769 mg，0.0384 mg的百里香酚溶液。进样10 μL。按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积（A）为纵坐标,百里香酚的质量浓度（ρ)为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程: 百里香酚A=8.55×106ρ+7.52×102,r=0.9999；表明百里香酚在0.04～1.23 mg/mL范围内具有良好的线性关系。
2.3; 精密度试验 ; 取药材按2.7项供试品溶液的制备方法制成供试品溶液1份,每次吸取10 μL,连续进样5次,测定峰面积,求得RSD为0.13%。