甘草酸对芍药苷大鼠肠吸收的影响

作者：李娜，陈西敬，吴磊，卢杨，何焱，苏云明。

【摘要】 目的研究甘草酸对芍药苷大鼠肠吸收的影响。方法采用大鼠肠外翻模型研究芍药苷的肠吸收，并用反相高效液相色谱法测定大鼠肠黏膜内外两侧的芍药苷浓度。结果芍药苷在大鼠十二指肠、空肠、回肠和结肠均有吸收，甘草酸几乎抑制芍药苷在各个肠段的吸收。结论甘草酸能减少大鼠肠吸收，机理可能是促进了芍药苷的外排或者促进了芍药苷在大鼠体内的转化。

【关键词】 芍药苷； 甘草酸； 肠外翻模型。

Abstract：ObjectiveTo study the effects of glycyrrhizin on intestinal absorption of paeoniflorin by the everted rat gut sac model.MethodsUsed a simple RP—HPLC method for the determination of paeoniflorin in the Krebs fluid. ResultsPaeoniflorin could be absorbed in duodenum, jejunum, ileum and colon of rats, and glycyrrhizin could inhibit the absorption of paeoniflorin. ConclusionGlycyrrhizin can reduce the uptake of paeoniflorin, and the mechanism is that it can improve the efflux from intestinal cells or the biotransformation of paeoniflorin.

Key words：Paeoniflorin; Glycyrrhizin; The everted rat gut sac model 　　芍药甘草汤出自张仲景《伤寒论》，由白芍和炙甘草两味药组成，原方是白芍和炙甘草各12 g，功效是酸甘化阴,缓急止痛，主治拘挛疼痛诸证。甘草的主要活性代表成分有甘草酸、甘草次酸。甘草酸在大鼠体内可以代谢转化为甘草次酸。芍药苷是白芍的代表性活性成分。在研究甘草酸对芍药苷药代动力学影响时发现一个很有趣的现象：采用尾静脉注射和灌胃两种给药途径，甘草酸分别能增大和减小芍药苷的生物利用度，推测可能是甘草酸影响了芍药苷的吸收，因此设计了本实验，考察甘草酸对芍药苷的肠吸收起什么作用。

1 材料与仪器。

1.1 仪器和试剂LC—10AT VP SHIMADZU高效液相色谱仪. SPD10AVP紫外检测器； HH2数显恒温水浴锅，常州国华电器有限公司；XW80A型旋涡混合器，上海医大仪器厂；Anke TGL16B高速离心机，上海安亭科学仪器厂。乙腈，色谱纯，美国Tedia公司；甲醇，色谱纯，美国Tedia公司。

1.2 药品及动物芍药苷纯度98％,甘草酸纯度98％，西安富捷生物技术有限公司；SD大鼠12只，上海西普尔－必凯实验动物有限公司提供，动物合格证号：SCXK(沪)20032002，（180±20） g。

2 方法。

2.1 HPLC系统条件HW2000色谱工作站。色谱柱为大连依利特 ODS 2 RPC18(4.6 mm×150 mm,5 μm)。流动相为乙腈—水(16/84, V/V), 流速1 ml·min—1。紫外检测波长231 nm,柱温为室温。

2.2 Krebs液中芍药苷样品的处理及标准曲线的测定样品的处理：样品高速离心后取上清液20 μl进样。 　　标准曲线的测定：取空白Krebs 液90 μl ,精密加入10 μl系列浓度工作液，配成浓度分别为0.025，0.05，0.1，0.2，0.4，0.8 μg·ml—1，涡旋，高速离心，取上清液20 μl进样。利用加入芍药苷浓度与测得的芍药苷面积做线性回归，得标准曲线方程：Y＝202 408X－80.906 ，R2=0.999 7。

2.3 方法精密度取Krebs液90 μl，精密加入10 μl 工作液，配成浓度为0.05，0.2，0.8 μg·ml—1，每个浓度做5管，样品的处理同标准曲线，计算精密度，用RSD表示。低、中、高3个浓度的精密度分别为1.26％，1.25％，2.26％。

2.4 肠管外翻模型的制备将180 g左右大鼠禁食12 h，自由饮水，脱颈椎处死，取所需肠段，用Krebs 液冲洗肠段使基本无内容物为止。将肠段移至4 ℃通有95％氧气的Krebs液中，将肠外翻，一端结扎，另一端插入空心塑料管结扎，然后注满Krebs液，随即放入盛有37 ℃恒温Krebs 液的锥形瓶中，通入95％氧气，待用。

2.5 芍药苷吸收实验根据实验安排，大鼠分为对照组和实验组，每组6只，每只取四段肠，分别为十二指肠、空肠、回肠和结肠，按照肠管外翻模型的制备方法制备肠囊。对照组锥形瓶中Krebs液含芍药苷20μM［1］，实验组锥形瓶中Krebs液含有芍药苷20μM和甘草酸11.67 μM，两组瓶中的Krebs液体积相同。将制备好的肠囊放入锥形瓶中，同时开始计时，于60 min时取样100 μl, 并立即补充空白Krebs液100 μl，在0，60 min取肠囊外液100 μl。取样结束后拿出肠段，在两端结扎处之间量肠段的长、宽，用来计算吸收表面积。