肿瘤坏死因子高对怀孕的影响 芹菜素预处理对缺血再灌注大鼠心肌肿瘤坏死因子—α表达的影响
摘要:目的 研究芹菜素对缺血再灌注大鼠心肌肿瘤坏死因子—α（TNF—α）表达的影响,探讨抗心肌缺血再灌注损伤的可能机制。
方法 将Wistar大鼠随机分为5组，假手术组、缺血再灌注对照组、溶剂对照组、芹菜素低剂量组、芹菜素高剂量组。
采用结扎左冠脉前降支制作缺血再灌注模型，心肌缺血30 min，再灌注2 h。
心肌苏木素碱性品红苦味酸（Hematoxylin basic fuchsin picric,HBPF）染色观察心肌形态学改变，免疫组化染色检测心肌组织TNF—α的表达。
结果 芹菜素组可降低心肌组织TNF—α的表达，与缺血再灌注对照组比较有统计学意义（P［1—3］。
本研究观察芹菜素预处理对缺血再灌注大鼠心肌组织肿瘤坏死因子—α（TNF—α）的影响，研究芹菜素对缺血再灌注心肌的保护作用。
1 材料与方法 1.1 实验药物 芹菜素纯度≥98%，陕西慧科植物开发有限公司，批号：AP20050727。
实验时芹菜素用聚乙二醇400（PEG400）和无水乙醇40 ℃水浴40 min药物溶解后，再用生理盐水稀释为含10%的PEG400和10%的乙醇溶液。
1.2 动物 Wistar大鼠50只，雌雄各半，体重220 g～250 g，购自中国医学科学院实验动物研究所,动物合格证号：SCXK（京）2005—0013。
1.3 试剂与仪器 BL—420E+生物机能实验系统、HX—300动物人工呼吸机和BI2000医学图像分析系统（成都泰盟科技有限公司）；即用型SABC（货号SA1022）、TNF—α多克隆抗体等（武汉博士德生物工程有限公司）。
1.4 方法 1.4.1 模型制作 Wistar大鼠用20%乌拉坦麻醉，仰卧位固定,用BL—420电脑系统连续记录Ⅱ导联心电图。
于胸骨左侧2 mm第四肋间开胸，在左心耳根部下缘2 mm处，用5/0医用无损伤缝合针于左心耳下方进针,1号丝线穿过冠状动脉前降支，然后将丝线穿于自制的尖端球形冠脉阻断塑料管。
稳定10 min后，股静脉给药。
除假手术组不拉紧丝线外，其他组给药后10 min拉紧丝线，观察2 h。
实验中以左心室前壁发绀及同步心电图Ⅱ导联ST段增高为结扎成功标志，以左心室前壁由发绀逐渐红润及ST段降低1/2为再灌注的标志［4］。
1.4.2 动物分组及给药 Wistar大鼠随机分为5组，每组10只，股静脉给药。
假手术组：穿线后10 min股静脉推注生理盐水4 mL/kg，持续观察2 h。
缺血再灌注对照组：缺血前10 min股静脉推注生理盐水4 mL/kg。
溶剂对照组：缺血前10 min股静脉推注含10%（体积分数）PEG400和10%（体积分数）无水乙醇溶液4 ml/kg。
芹菜素低�高剂量组：缺血前10 min分别以2 mg/kg、4 mg/kg股静脉给药。
1.4.3 心肌苏木素碱性品红苦味酸（HBPF）染色和TNF—α的免疫组化染色 HBPF染色（缺血缺氧心肌呈鲜红色至深红色,正常心肌呈黄色或黄棕色），另一部分采用链霉亲和素（SABC）免疫组化检测心肌TNF—α的表达。
在100倍光镜下通过BI2000医学图像分析系统采集免疫组化图像，每张切片随机采取10个不重叠视野，测量灰度值。
1.5 统计学处理 计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间差异采用单因素方差分析。
采用SPSS 15.0统计软件完成。
2 结 果 2.1 HBPF染色结果 假手术组全部心肌纤维染为黄色；缺血再灌注对照组和溶剂对照组大部分心肌纤维为阳性染色；芹菜素低剂量组较多心肌纤维为红色，肌纤维呈灶状分布，芹菜素高剂量组个别心肌纤维染为红色，胞浆红色呈点状分布。
2.2 心肌组织TNF—α表达 在假手术组心肌组织中仅散在少量表达于心肌细胞浆内。
在缺血再灌注对照组、溶剂对照组大量心肌细胞胞浆被染成黄色，颜色深。
芹菜素高剂量有少量的心肌细胞胞浆被染成黄色，颜色淡染，随着芹菜素剂量的增加颜色逐渐由深变浅。
各组与假手术组比较TNF—α表达明显增多（P［5］。
心肌缺血再灌注诱发大量表达的TNF—α可通过多种途径影响心肌功能并造成心肌损伤［6，7］：如抑制心肌收缩功能、诱导心肌细胞凋亡、促进中性粒细胞（PMN）的黏附、浸润、活化等，它可直接引起组织损伤，之后刺激细胞反应通过上调细胞间黏附分子—1（ICAM—1）或组织因子（tissue factor,TF） 的表达而更加进一步加重组织的损伤。
本研究结果提示，大鼠IR组在缺血30 min再灌注2 h后,TNF—α在心肌组织细胞浆及血管壁中被大量激活，证实了心肌缺血再灌注确实有炎性反应存在；芹菜素预处理后TNF—α的表达又都随之下调，同时HBPF染色结果提示，芹菜素高剂量组可明显减轻心肌缺血缺氧程度逐渐，降低缺血再灌注损伤后TNF—α的表达可能是芹菜素保护心肌IR损伤的重要机制。
本实验溶剂对照组结果排除了溶剂PEG400和乙醇对芹菜素组的影响。
芹菜素作为一种来源充足的天然植物成分，在防治心肌IRI方面具有很好的应用前景。
参考文献： ［1］ Katano T,Kamata Y,Ueno T.Biochemical characterization of an effective substrate and potent activators of CK2 copurified with Bowman—Birk—type proteinase inhibitor from soybean seeds in vitro［J］.Biochim Biophys Acta,2005,7（1）:18. ［2］ 历强,马建仓.芹菜素的药理学研究进展［J］.国外医学：中医分册,2003,25（3）:147—149. ［3］ 历强.芹菜素抑制肿瘤作用的研究进展［J］.陕西医学杂志,2005,5（32）:439—441. ［4］ Lindsten T,Ross AJ,King A,et al.The combined functions of proapoptotic Bcl—2 family members bax are essential for normal development of multiple tissues［J］.Mol Cell,2006（6）:1389—1399. ［5］ Stangl V,Baumann G,Stangl K,et al.Negative inotropic mediators released from the heart after myocardial ischemia—reperfusion［J］.Cardiovasc Res,2002,53:12—30. ［6］ 唐旭东，姜建青.心肌缺血再灌注中肿瘤坏死因子—α表达及与核因子—κB活化的关系［J］.华西医学，2003，18（2）：161—163. ［7］ 郭平凡，陈福真.抗肿瘤坏死因子—α单克隆抗体减轻骨骼肌缺血再灌注损伤的研究［J］.中华实验外科杂志，2002，19（1）：72—73. 作者简介:张慧芝（1977―），女，讲师，硕士研究生，现工作于山西大同大学医学院（邮编：037000）；白建平、于肯明（通讯作者），工作于山西大同大学医学院（邮编：037000）；史婷婷，为山西医科大学在读硕士研究生。
（收稿日期：2011—04—02） （本文编辑 王雅洁） 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文。