毒热平注射液抗流感病毒作用的体内实验研究
作者：张艳丽，顾立刚，范新生，李澎涛。
【摘要】 目的：观察毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的死亡保护作用和对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用。方法:用流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠，建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型，观察肺指数、病毒致小鼠病死率。结果：毒热平注射液的大、中剂量组对小鼠流感病毒性肺炎有抑制作用，对流感病毒感染小鼠具明显的死亡保护作用。结论：毒热平注射液在小鼠体内具有效的抗流感病毒作用。
中医学称流感为“时行感冒”或“重伤风”，其不同于普通感冒，是由时邪病毒引起的一种外感热病，无季节性和地域性，具有传染性和流行性。流感病毒抗原的易变性使疫苗难以达到理想预防效果［1］;化学药物因其特异性不强，副作用明显，性价比低下等特点而难以广泛应用。在此我们开展了新药毒热平注射液的抗流感病毒实验研究，为该药的临床应用奠定基础，拓宽祖国医药的开发和使用前景。
1 实验材料。
1.1 病毒 流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)，中国中医药研究院中医所提供，本实验室—76℃保存备用。于9日龄鸡胚尿囊腔连续传代2次后，测血凝滴度为1：512。
1.2 动物 ICR小鼠，体重14g±1g，合格证号：SLXK(京20052006)，级别:SPF/VAF。小鼠及饲料均由北京维通利华实验中心提供。饲养环境：本室动物室动物洁净柜，室温：(22±2)℃，相对湿度：50%±10%。
1.3 药物 毒热平注射液，棕色液体，174mg/10ml；阳性对照药：注射用双黄连(冻干粉)：600mg干粉/支，实验前用生理盐水配制成40mg/ml备用，批号:0501004(哈药集团中药二厂)；利巴韦林：100mg/ml，批号：0506251(石药集团欧意药业有限公司)。
2 方法和结果。
2.1 流感病毒对小鼠半数致死量(LD50)的测定 取ICR小鼠50只,用单纯随机抽样法随机平均分成5组,病毒为(2—6—2—10)/mL5个稀释度，每只小鼠经乙醚轻度麻醉后分别滴鼻感染不同稀释度病毒液0.05ml，以死亡和生存为观察指标，24h内死亡的不予统计。每天观察,直至感染后第14d为止。按ReedMunch公式［2］计算出病毒的半数致死量(LD50)为10—2.2/mL。
2.2 对流感病毒所致小鼠死亡的保护作用［3］ 取ICR小鼠140只,随机分组、给药见表1。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉，正常对照组以生理盐水0.05ml滴鼻，其余各组以4个LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05ml，于感染当天开始腹腔给药，对照组在同等条件下注射生理盐水，每天1次，连续10d。从感染之日算起，连续观察15d,每天观察小鼠发病症状并记录小鼠感染病毒后的死亡数和死亡时间，按以下公式计算出死亡保护率和延长生命率，结果采用组间t检验进行统计学处理(见表1)。
正常组小鼠饮食正常，精神良好，毛发光泽，体重自然增加；模型组小鼠自感染后第4d开始出现呼吸急促、抱团蜷缩、毛发涩乱，体重下降；第6d开始出现死亡,12d后基本不死亡了。利巴韦林对照组小鼠感染后第6d仅出现轻微的畏寒无力、呼吸急促症状，第8d后症状基本消失。双黄连组第6d开始出现死亡,第10d停止死亡，但死亡数较模型组少。毒热平注射液各组，感染后第6d开始出现蜷缩畏寒症状，体重明显下降，开始出现死亡,第10d状态逐渐好转，活动增加，体重逐日恢复但较利巴韦林组低。表1 毒热平注射液对流感病毒致小鼠死亡的保护作用组 注：与模型组比较，△P0.05；△△P0.001；与正常组比较，##P0.001。 结果表明，毒热平注射液大、中剂量组对流感病毒感染小鼠具明显的保护作用，与模型组有显著性差异，与双黄连组无差异。