苦参素对实验性肝纤维化的干预作用
作者：鄂裘恺 郁林曦 朱歆鑫 张慎彦 罗琳 周鸣鸣 鄂群。
【摘要】 目的：观察苦参素对四氯化碳（CCl4）诱导的实验性肝纤维化的干预作用。方法：将SD大鼠分成正常对照组、模型组、苦参素小剂量治疗组（40 mg/kg）、中剂量治疗组（80 mg/kg）、大剂量治疗组（160 mg/kg），造模4周后苦参素治疗至实验第10周，取血测相关血清学指标，计算肝脏指数，测定肝组织匀浆中HYP和MDA含量。结果：苦参素能降低肝纤维化大鼠血清丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、胆汁酸（TBA）、γ－谷氨酰转移酶（GGT）和肝脏指数，同时能减少肝组织中羟脯氨酸（HYP）和MDA含量（P0.05或P0.01）。结论：苦参素具有抗CCl4诱导的实验性肝纤维化的作用。
[Abstract] Objective:To investigate the intervention effect of oxymatrine on experimental liver fibrosis induced by carbon tetrachloride（CCl4） in rats. Methods: Sprague—Dawley （SD） 50 rats were randomly divided into 5 groups: the normal control group， model control group without treatment， model with oxymatrine treatment of low dose（40 mg·kg—1）， middle dose（80 mg·kg—1） and high dose group（160 mg·kg—1）. The rat liver fibrosis model was prepared by administration of CCl4. In the development of fibrosis， oxymatrine was administered to rats from the 4th week to 10th week after CCl4 induction. Then rats were sacrificed， the serology related indicant in rat serum， liver index， content of HYP and MDA in the homogenate of hepatic tissue were measured. Results: Oxymatrine lower the level of ALT， AST，TBA，GGT in serum and liver index as well reduced the HYP and MDA content in liver tissues in liver fibrosis model rats. Conclusion: Oxymatrine has protective effect on CCl4—induced liver fibrosis in rats.
[Key words] Liver fibrosis; Extracellular matrix; Rat；Oxymatrine; Carbon tetrachloride。
肝纤维化（liver fibrosis）是各种慢性肝病发展为肝硬化（1iver cirrhosis）的必经阶段。肝纤维化是由各种因素引起肝细胞损害和炎症，在修复过程中导致肝脏细胞外基质（extracellular matrix，ECM）异常增多和过度沉积的病理过程。苦参素又称氧化苦参碱，是由中药苦豆子和苦参根中提取的一种生物碱，一般认为其具有抗炎、抗病毒、调节免疫反应，抗肿瘤等生物学作用[1—2]。本研究观察苦参素对CCl4诱导的实验性肝纤维化的干预作用[3]，为进一步开发利用苦参素提供实验依据。
1 材料与方法。
1.1 实验动物 SD大鼠70只，体重140~160 g，雌雄兼用，由南通大学实验动物中心提供。动物许可证号：SCXK（苏）2002—0019。所有动物自由摄食，饮水。
1.2 药品与试剂 （1）四氯化碳（CCl4）：宜兴市第二化学试剂厂，批号20010608，使用时用食用花生油配制成40%的油溶液；（2）苦参素：（主要成分为氧化苦参碱oxymatrine， OM）:江苏正大天晴药业股份有限公司，批号:20021004。细结晶颗粒，按需用灭菌生理盐水配制呈溶液使用；（3）丙二醛（MDA）测定试剂盒，南京建成生物医学工程研究所，批号：20030307；（4）羟脯氨酸（HYP）含量测定试剂盒，南京建成生物医学工程研究所，批号：20030321。
1.3 实验方法。
1.3.1 实验动物分组及模型制备[4] SD大鼠50只，随机分为5组：Ⅰ正常对照组、Ⅱ模型组、Ⅲ 苦参素小剂量治疗组（40 mg/kg）、Ⅳ苦参素中剂量治疗组（80 mg/kg）、Ⅴ苦参素大剂量治疗组（160 mg/kg），每组10只动物，雌雄各半。各造模组均采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型：用40%CCl4花生油溶液3.0 ml/kg皮下注射，每周2次，共10周；动物每周称重1次，并根据体重调整CCl4的剂量，正常对照组仅以花生油等容量皮下注射。苦参素治疗组从CCl4造模后第4周开始至第10周腹腔注射给药，每日1次，给药容量均为1.0 ml/kg。正常对照组、模型组腹腔注射等容量灭菌生理盐水，每日1次。
1.3.2 肝功能的检测 造模至第10周末，全部动物禁食16 h后，断头取血。血液40 ℃条件下2000 rpm离心15 min，吸取血清于4 ℃冷藏，24 h内用生化自动分析仪测定谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、胆汁酸（TBA）和γ－谷氨酰转移酶（GGT）。
1.3.3 肝脏指数的测算 造模至第10周末，全部动物称体重。取血后，将动物解剖，取出肝脏，滤纸拭干，置于电子天平上称重，以肝脏指数＝肝脏重量/体重×100，计算肝脏指数。同时剪取肝脏组织—20 ℃保存，备制作肝匀浆液之用。
1.3.4 肝组织中HYP和MDA含量的检测 取10％肝组织匀浆液测定每份肝匀浆中HYP和MDA与特定试剂反应后溶液的吸光值，并根据肝组织匀浆液中总蛋白的含量，分别计算肝脏中HYP和MDA的含量。
1.3.5 统计学方法 使用Stata6.0统计软件包进行数据处理。数据以■±s表示，用单因素方差分析和F检验处理数据，以P0.05为差异有统计学意义。