地域差异与蛋氨酸合成酶基因多态性分布的相关性
【摘要】 目的 比较青海省与其他地区正常女性蛋氨酸合成酶基因的分布特点。方法 采用PCR — RFLP技术对125例正常人蛋氨酸合成酶基因进行扩增及图谱分析,结合既往发表的文献进行不同地区间的比较。结果 青海省正常女性中MS基因型以A /A 最多见, A /G次之。A /A 基因型频率为0.5760 、A /G为0.4160、G/G为0.0080。与其他地区相比较, MS基因型在青海省正常女性中的分布与国内其他地区人群中的分布差异显著。结论 蛋氨酸合成酶基因多态性在不同地区间的分布存在明显差异。
Abstract Objective To compare the distribution feature ofMethionine Synthase gene between QingHai Province and other regions. Methods The Methionise Synthase genotypes of 125 women in QingHaiProvince were determined by PCR — RFLP assay. Results Ms genotype frequency: A /A 0.5760, A /G 0.4160, G/G 0.0080.The genetypes frequencies of Methionise Synthase in nomal feature of QingHai were different from those in other area in China. Conclusion There has geographical variation in the Methionise Synthase Polymorphism in China.
Key words Methionine Synthase Polymorphism Geographical variation。
研究发现血清同型半胱氨酸(Hcy) 为心血管、脑血管、周围血管系统疾病及先天性畸形的独立危险因素,在相关疾病的发生、发展过程中起着重要的作用。近年来有关Hcy 与妊娠并发症的研究也取得了明显进展［1］ 。在妇产科领域, 有关Hcy与胎儿先天畸形、习惯性流产、先兆子痫及子宫内膜癌等疾病的关系也是近几年的研究热点。其中, 甲硫氨酸代谢相关酶或辅助因子缺乏可致同型半胱氨酸在血中蓄积, 而蛋氨酸合成酶(methionisesynthase, MS) 是Hcy再甲基化途径中的重要酶。我国人口众多,民族各异, 且背景复杂, 蛋氨酸合成酶基因的分布可能存在不同。本文利用聚合酶链式反应— 限制性片段长度多态性技术( PCR — RFLP) 对125例青海省正常女性蛋氨酸合成酶基因的多态性进行检测, 结果报告如下。
1 资料与方法。
1.1 研究对象。
2005年6月至2006年9月在青海省妇幼保健院正常分娩的正常女性125 例, 排除生殖器官畸形、先天性遗传性疾病及血凝异常者。平均年龄25.67岁。 彼此之间无亲缘关系。
1.2 引物的设计及合成。
MS A2756G所用引物参照文献［2］ , 正义链: 5′CAT GGA AGA ATA TGA AGA TAT TAGAC 3′; 反义链: 5′GAA CTA GAA GAC AGA AAT TCT CTA3′, 由大连宝生工程公司合成。
1.3 研究方法。
1.3．1 DNA提取: 取外周血4 ml, 采用Qiagen公司DNA提取试剂盒, 按照试剂盒说明书进行提取。
1.3.2 PCR 扩增: PCR 反应体系体积为25 μl, 10 μlDNA, 0.6 μl Taq 聚合酶, 14.4 μl MS 反应体系混合液。PCR反应条件: 94℃预变性5min, 94℃ 45 s, 55℃ 45 s,72℃ 60 s, 共35个循环。
1.3.3 RFLP 分析。
1.3.3.1 HaeⅢ内切酶消化产物: 取17 μlPCR纯化产物, 2 μl Buffer, 1 μl Hae Ⅲ内切酶, 37℃水浴1 h。
1.3.3.2 3%琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物: 取20 μl酶切产物加入3%琼脂糖凝胶负极端的加样孔, 以溴酚蓝为指示剂, 溴化乙锭(EB) 为染色剂, 在90 V电压下电泳30 min左右, 然后在紫外分析仪上观察结果。
1.3.4 将所得结果与文献报道的其他地区、种族人群MS基因分布特点进行比较［3，4］。
1.4 统计学分析方法。
计算出正常人群中MS等位基因的频率,然后进行Hardy — weinberg遗传平衡定律检验。对不同地区间MS基因各亚型频率采用Kruskl—Wallis检验，等位基因频率采用χ2检验。