金花茶组植物化学成分的定量分析
作者：唐前 罗燕英 黄连冬 陆敏珠 唐玲 史丽颖 冯宝民 王永奇。
【摘要】 目的测定金花茶、毛瓣金花茶、凹脉金花茶、四季金花茶、薄叶金花茶不同植物部位中总皂苷、总多酚（鞣质）、总黄酮的含量。方法采用紫外分光光度法。结果其总皂苷、总多酚（鞣质）、总黄酮的含量依次为：①金花茶花蕾醇提物：21.30%、6.56%（0.34%）、21.76%；叶子醇提物：43.24%、3.95%（1.57%）、0.93%；叶子水提物：9.91%、6.69%（1.34%）、5.19%；种子醇提物：13.53%、5.88%（0.83%）、6.85%。②毛瓣金花茶叶子醇提物：43.49%、6.79%（1.65%）、1.54%。③ 凹脉金花茶叶子醇提物：36.29%、13.19%（5.33%）、1.12%；种子醇提物：20.58%、5.29%（0.14%）、0.33%。④四季金花茶叶子醇提物：35.90%、7.01%（0.47%）、0.78%。⑤薄叶金花茶叶子醇提物：30.08%、7.57%（0.19%），0.82%。结论紫外分光光度法测定以上3种物质简便易行，准确可靠，重复性和回收率都较理想。
Abstract:ObjectiveTo determine the chemical constituents of total saponin, total polyphenol (tannin) and total flavonoids in Section Chrysantha Chang. MethodsTheir contents were determined by spectrophotometry.ResultsThe contents of total saponin,total polyphenol ( tannin) and total flavonoids were：①21.30%,6.56%（0.34%）,21.76%； 43.24%,3.95%（1.57%）,0.93%； 9.91%,6.69%（1.34%）,5.19%； 13.53%,5.88%（0.83%）,6.85%；②43.49%,6.79%（1.65%）,1.54%；③36.29%,13.19%（5.33%）,1.12%； 20.58%,5.29%（0.14%）,0.33%；④35.90%,7.01%（0.47%）,0.78%；⑤30.08%,7.57%（0.19%）,0.82% respectively.ConclusionThe method is convenient and reliable to determine the three substances, and the reproducibility and the recovery are fairly good.
Key words:Section Chrysantha Chang; Total saponin; Total polyphenol（tannin）; Total flavonoids。
20世纪60年代初，在我国广西首次发现黄色山茶属植物——金花茶Camellia chrysantha (Hu)Tuyama,震惊世界。到目前为止，已发现并命名的黄花山茶属植物已达32种5变种，1998年张宏光教授将其归类为金花茶组。其中除越南与广西接壤的北部有3种，云南、贵州、四川各有1种外，其余26种、5变种均产于我国广西南部和西南部的亚热带南缘和热带北缘地区。90%分布于中国，80%分布于广西，说明中国是金花茶组植物的特产国，而广西是金花茶组的特产区。
但因为金花茶组植物发现较晚，加之分类上争议时间较长，所以尽管在园林、花卉界轰动较大，亦被国家列为珍稀保护植物，但对它的现代研究甚少。本文以皂苷、多酚、黄酮类成分为指标，对其中产量大、资源较丰富的5种金花茶组植物化学成分进行了分析测定。现报道如下。
1 仪器与试药。
1.1 仪器Unico7200可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司); Laborata 4000 型旋转蒸发仪( Heidolph 公司) ;BP210S 十万分之一电子天平(Sartorius 公司) ; Jasco v﹣2560紫外可见分光光度计(JASCO 日本分光株式会社) 。
1.2 试药5种金华茶组植物均采集于广西(由广西林科院梁盛业鉴定，标本现存于大连大学药物研究所）;对照品由本实验室提供； 芦丁(东京化成工业株式会社, 纯度98 %) ; 齐墩果酸( 中国药品生物制品检定所, 批号:1107092200304 , 纯度98 %以上) ; 没食子酸(中国药品生物制品检定所, 批号: 1205632200412 , 纯度99.1 %) ; 所用试剂均为分析纯; 实验用水为蒸馏水。
2 方法与结果。
2.1.1 对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品25 mg , 置50 ml 容量瓶中, 加入甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 得0.5 mg·ml— 1的对照品溶液, 备用。
2.1.2 供试品溶液的制备精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏A(g), 置100 ml 容量瓶中加入甲醇, 溶解并稀释到刻度, 摇匀, 得B(mg·ml— 1)的溶液, 备用。
2.1.3 测定波长的选择齐墩果酸对照品溶液和供试品溶液香草醛—冰醋酸—高氯酸显色后, 在紫外可见分光光度计上, 波长400～800 nm 区间扫描。均在551 nm 处有最大吸收, 因此选择551 nm为测定波长, 测得的结果以齐墩果酸为基准计算总皂苷的含量。
2.1.4 线性关系考察精确吸取齐墩果酸标准溶液0.0，0.05，0.10，0.15，0.20 和0.25 ml 分置于具塞试管中,挥去甲醇, 精密加入5%香草醛—冰醋酸溶液(新鲜配制)0.2 ml, 高氯酸0.8 ml , 摇匀, 于60 ℃水浴中加热15 min后, 置冰浴中冷却。加冰醋酸5 ml, 摇匀, 立即在551 nm波长下测定吸光度A, 同时以试剂空白作参照。以吸光度A为纵坐标, 体积V(ml ) 为横坐标, 绘制标准曲线。得回归方程A=2.252V—0.0066（R2=0.999 4）。
2.1.5 重复性实验精确吸取C（ml）的供试品溶液, 置于具塞试管中, 挥去甲醇, 照标准曲线项下的方法操作, 平行做5 次实验, 测定吸光度A, 代入回归方程, 计算总皂苷的含量。A，B，C的数据见表1。结果见表2。表1 金花茶总皂苷的实验数据表2 总皂苷含量测定结果%。
2.2 多元酚及鞣质的含量测定［2,3］。
2.2.1 对照品溶液的制备精确称取干燥至恒重的没食子酸对照品10 mg , 置100 ml 棕色容量瓶中, 加水溶解并稀释到刻度, 摇匀, 精密量取25 ml , 置100 ml 棕色量瓶中,用水稀释至刻度, 摇匀, 得浓度为0.025 mg·ml— 1 的对照品溶液, 备用。
2.2.2 供试品溶液的制备精确称取金花茶组植物提取物的干浸膏 D(g), 置250 ml 容量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 摇匀。过滤, 弃去初滤液50 ml , 精密量取100 ml , 置500 ml 棕色容量瓶中, 用水稀释至刻度, 摇匀,得 E(mg·ml— 1)的供试品溶液Ⅰ; 精密吸取供试品溶液Ⅰ100 ml , 加至已盛有2.4 g 干酪素的500 ml 具塞锥形瓶中, 密塞, 置30 ℃水浴中保温1 h , 时时振摇, 取出,放冷, 摇匀, 滤过, 弃去初滤液, 续滤液作为供试品溶液Ⅱ, 备用。
2.2.3 测定波长的选择没食子酸对照品溶液和供试品溶液经磷钼钨酸—碳酸钠显色后, 在紫外可见分光光度计上,波长400～1 000 nm 区间扫描。均在754 nm 处有最大吸收,因此选择754 nm 为测定波长, 测得的结果以没食子酸为基准计算总酚和鞣质的含量。
2.2.4 线性关系考察精确吸取没食子酸标准溶液0 ，0.5，1.0，1.5，2.0 和2.5 ml 分别置10 ml 棕色容量瓶中, 各加水至5 ml , 再分别加入磷钼钨酸试液1 ml , 用29% Na2CO3 溶液稀释至刻度, 摇匀, 以相应的试剂为空白, 30 min 后, 在754 nm 波长下测定吸光度A。以吸光度A为纵坐标, 体积V(ml) 为横坐标, 绘制标准曲线。得到回归方程A=0.353 2V—0.029 2（R2=0.999 1）。