青天葵抗甲、乙型流感病毒作用研究
【摘要】 目的研究青天葵在体外抗甲、乙型流感病毒株作用。方法选用狗肾细胞培养法考察青天葵不同极性部位对甲型（FM1）、乙型（昆40B）流感病毒的作用。结果青天葵水溶性部位对甲型流感病毒FM1有抑制作用。结论青天葵具有体外抗甲型流感病毒作用。
Abstract:ObjectiveAntiviral actions of Nervilia fordii against influenza virus in vitro were studied. MethodsCell culture technology was used in MDCK cells to observe antiviral action of abstracts of Nervilia fordii against influenza virus A（FM1 strain） and B （Kun 70B strain）.ResultsWater soluble part of Nervilia fordii can inhibit the proliferation of influenza virus A （FM1 strain）in MDCK cells.ConclusionNervilia fordii is effective against influenza virus A in vitro.
Key words:Nervilia fordii; Influenza virus FM1 strain; Influenza virus 70B strain; Antiviral action。
青天葵为兰科植物毛唇芋兰Nervilia fordii (Hance) Schitr.，以全草或块茎入药，性平，味苦、甘。有清肺止咳，健脾消积，镇静止痛，清热解毒、散结消疬之功效，主治肺痨、咳嗽咳血、瘰疬、肿毒、跌打损伤、小儿疳积、精神病、口腔炎、急性咽喉炎等［1］。
目前青天葵的研究多集中在栽培、组织培养等方面，其药效学方面的研究报道较少。本实验对青天葵的抗流感病毒作用进行观察，现报告如下。
1 材料。
1.1 药物青天葵药材购自广东致信药业有限公司，经谭树辉鉴定为兰科植物青天葵Nervilia fordii (Hance) Schitr.药材用乙醇渗漉，渗漉液浓缩成浓稠浸膏，加蒸馏水转溶，水液加石油醚萃取至石油醚层无色，石油醚层弃去。水层用氯仿萃取，至氯仿层 无色，合并氯仿萃取液，浓缩得氯仿部位（1）；水层用醋酸乙酯萃取，至醋酸乙酯层无色，合并醋酸乙酯萃取液，浓缩得醋酸乙酯部位（2）；水层用正丁醇萃取，至正丁醇层无色，合并正丁醇萃取液，浓缩得正丁醇部位（3）；余下的水层部位（4）；采用水蒸汽蒸馏法提取得到挥发油部位（5）。
阳性对照药病毒唑，批号0301006，由湖北医药工业研究院提供。
1.2 毒种甲型流感病毒FM1株、乙型流感病毒昆40B株由中国医学科学院医药生物技术研究所提供，于MDCK狗肾细胞传代，以病变及鸡红血球血凝法判断滴度，在37℃，体积分数为5%CO2孵箱中培养。
1.3 狗肾细胞（MDCK）由广东省防疫站赠送，广州中医药大学热带病研究所传代保存。
1.4 细胞培养液和维持液细胞培养液和维持液各为含体积分数为10%、2%的小牛血清、100 kU/L青霉素、链霉素的DMEM（GIBCOBRL公司产品）。
2 方法与结果。
按照《中药新药研制开发技术与方法》［2］上的要求进行。测定病毒的半数致细胞病变量（TCID50），抗病毒试验在96孔微量板上进行，每孔0.1 ml，细胞数为1×105个/ ml，长成单层后，将青天葵提取物用维持液稀释成4个不同浓度，弃去原培养液后将不同浓度样品加入细胞孔中，每孔0.1 ml，以细胞不出现病变的最小稀释度为该药液对细胞无毒界限。同时在MDCK细胞上测定攻击病毒TCID50。实验时设病毒对照组、正常对照组、药物毒性组及阳性对照组（病毒唑）。置37℃，体积分数5%CO2孵箱中培养。每天倒置显微镜下观察病变并记录，观察7 d终止。实验结果见表1。表1 青天葵不同极性部位对甲、乙型流感病毒的抑制作用（略）。
由表1可知，阳性对照药物病毒唑亚毒性浓度100 μg/ml可以抑制FM1病毒、昆40B病毒。青天葵水层部位浓度为50 mg/ml时，对甲型流感病毒FM1有抑制作用，其作用强度与病毒唑相同，其他部位对甲型流感病毒均无抑制作用，青天葵5种提取部位对乙型流感病毒昆40B均无抑制作用。
3 讨论。
病毒是最小的生物病原体,不具有细胞结构,主要由核酸核心和蛋白质外壳构成(称为衣壳)构成。在临床感染疾病中,约85%是由病毒引起的。而且,很多病毒感染的致病率很高,并发症严重［3］。
流行性感冒简称流感,是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病,它具有高度的传染性, 呈周期性大流行,是危害人类健康的一种重要疾病。研究表明，在呼吸道疾病患者中，小儿的病毒检出率为58.5%，呼吸道合胞病毒占首位，其次是流感病毒；成人为39.74%，流感病毒占首位，可见病毒是上呼吸道感染的主要原因之一［4］。