时间分辨荧光免疫技术在乙肝病毒标志物定量检测中的临床应用

［摘要］ 目的：探讨乙肝患者血清乙肝标志物的相互关系，为乙肝的诊治、预防提供科学依据。方法：用TRFIA法定量测定乙肝表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体和核心抗体指标。结果：在720例血清中共检出13种抗原抗体模式，HBsAg阳性的模式共6种533例，HBsAg检出率为74.03％，且在5 ng／ml及以下HBsAg检出率为8.75％(63／720)；其中1+3+5模式167例占23.19％，1+4+5模式313例占43.37％，1+5模式21例占2.92%，1+3模式18例占2.5%，1+4模式9例占1.25％，1模式5例占0.69％。HBsAg阴性模式共6种164例占病例总数的22.78％；其中2模式23例占3.19％，4+5模式15例占2.08％，2+4+5模式16例占2.22%，2+5模式39例占5.42%，5模式18例占2.5%,2+4模式53例占7.36％。抗原抗体全阴性23例占3.19％。结论：TRFIA是测定乙肝患者血清中HBVM含量较特异、灵敏的方法，能反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度；乙肝血清学标志物定量检测能反映患者体内病毒的存在状态和机体的免疫状况，对疾病诊断、病情监测、药效评价、预后监控及筛选用药方案等都具有很高的实用价值。

［关键词］ 乙肝病毒标志物；时间分辨荧光免疫技术；临床应用。

我国为乙肝病毒(HBV)感染高发区，约有1亿人为乙肝表面抗原携带者。HBV感染后血清学检测组合的标志模式多且复杂，临床常用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行乙肝病毒标志物(HBVM)的检测和用聚合酶链反应(PCR)法进行HBVDNA的检测来判断HBV的感染或疗效。由于ELISA法简单、方便、快速的优点在临床得到广泛应用，但受方法学本身的限制，它不能提供HBVM的具体含量，只能作为阴阳性判断，故不可能完成HBV感染的动力学观察。用PCR法进行HBVDNA的检测由于受到各种因数的影响，不能在临床上广泛使用，而时间分辨荧光免疫技术(TRFIA)的出现提供了对HBVM进行定量检测的手段。TRFIA法具有灵敏度高、重复性好、特异性强、定量范围宽等优点［1，2］。作者采用TRFIA法对720份血清标本进行HBVM检测，并对结果进行了分析。现报告如下。

1　材料与方法。

1.1　标本来源　本院门诊和住院部的720例患者，男435例，女285例，年龄3岁～78岁。清晨空腹静脉取血3 ml送检。

1.2　肝炎病毒血清学标志物检测　720例患者均以采用TRFIA法检测血清HBVM(HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc)，TRFIA检测仪泰莱1及配套试剂由广州丰华生物工程有限公司提供。阳性标准为：HBsAg≥0.2 ng／ml；抗HBsAg≥10 mIU／ml；HBeAg≥0.03 Ncu／ml；抗HBe≥2.00 Ncu／ml；抗HBc≥0.1 Ncu／ml。操作步骤严格按说明书进行。对可疑结果：如低浓度阳性结果，HBsAg和抗HBs或HBeAg和抗HBe同时阳性的均进行双孔复查。

1.3　统计与分析　抗原抗体排列顺序：HBsAg；抗HBs；HBeAg；抗HBe；抗HBc。以阳性项目的序号代表该阳性项，同一患者血清HBVM组合称抗原抗体模式(如1+3+5代表HBsAg，HBeAg，抗HBc同时阳性)，按抗原抗体模式统计分析。

2　结果。

2.1　抗原抗体模式　实验中共检出13种抗原抗体模式，HBsAg阳性的模式共6种，533例，HBsAg检出率为74.03％，且在5 ng／ml及以下HBsAg检出率为8.75％(63／720)；其中1+3+5模式167例占23.19％；1+4+5模式313例占43.37％；1+5模式21例占2.92％；1+3模式18例占2.5％；1+4模式9例占1.25％；1模式5例占0.69％。HBsAg阴性的模式共6种，164例占病例总数的22.78%；其中2模式23例占3.19％；4+5模式15例占2.08%，2+4+5模式16例占2.22％；2+5模式39例占5.42％；5模式18例占2.5%，2+4模式53例占7.36％。抗原抗体全阴性23例占3.19％。

2.2　HBVM浓度　在1+3+5模式中HBsAg、HBeAg、抗HBc的浓度分别为：(215.38±98.76) ng／ml、(1.15±0.82) Ncu／ml、(12.32±5.16) Ncu／ml；在1+4+5模式中HBsAg、抗HBe、抗HBc的浓度分别为：(152.59±113.38) ng／ml、(25.73±12.54) Ncu／ml、(14.12±8.74) Ncu／ml；在1+5模式中HBsAg、抗HBc的浓度分别为：(125.38±98.73) ng／ml、(12.52±5.79) Ncu／ml；在1+3模式中HBsAg、HBeAg的浓度分别为：(183.56±75.24 )ng／ml、(1.02±0.74) Ncu／ml；在1+4模式中HBsAg、抗HBe的浓度分别为：(118.28±67.23) ng／ml、(24.49±6.89) Ncu／ml；1模式中HBsAg的浓度为(2.12±0.75) ng／ml。且1+3+5模式中HBsAg分布在200 ng／ml以上的占此模式的74.85%(125例)；在1+4+5模式中HBsAg分布在200 ng／ml以上的占此模式的39.62％(124例)；1模式中HBsAg的浓度在0.3 ng/ml～6 ng/ml之间。2+4+5模式中抗HBs、抗HBe、抗HBc的浓度分别为：(637.52±578.25) mIU／ml、(18.24±10.92) Ncu／ml、(6.34±5.70) Ncu／ml；2+5模式中抗HBs、抗HBc的浓度分别为：(260.17±75.36) mIU／ml、0.29±0.11(Ncu／ml)；2+4模式中抗HBs、抗HBe的浓度分别为：(536.56±300.34) mIU／ml、(15.12±8.13) Ncu／ml；4+5模式中抗HBe、抗HBc的浓度分别为：(15.12±11.35) Ncu／ml、(12.24±10.11) Ncu／ml；2模式中抗HBs的浓度为(289.34±156.29) mIU／ml；2+4+5模式中抗HBs的浓度主要分布在870 mlU／ml以上；2+5模式和2+4模式、2模式中抗HBs的浓度主要分布分别在130 mIU／ml～260 mIU／ml、130 mIU／ml～420 mIU／ml之间，5模式中抗HBc的浓度为：0.60 Ncu／ml±0.28 Ncu／ml。