川乌植物内生真菌的分离和分类鉴定
作者：李治滢 陈有为 杨丽源 李绍兰 吴少华。
【摘要】 目的从川乌植物的根和茎中分离内生真菌，并进行分类鉴定。方法经显微形态观察进行内生真菌的分类鉴定。结果川乌植物根和茎中分离获得61株内生真菌，归属为2纲，5目，6科，17个属。结论川乌植物不同部位内生真菌的数量、组成与种群分布存有差异； 从川乌植物中分离内生真菌尚属首次报道。
Abstract：ObjectiveTo isolate and identify some endophytic fungi from the root and stem of Radix Aconiti. MethodsIdentification of endophytic fungi from Radix Aconiti was carried out by morphology. ResultsSixty—one strains of endophytic fungi were isolated from Radix Aconiti，which belonged to seventeen genera，six families and five orders. ConclusionThe diversities made obviously a great difference in quantity, composition and distribution of the endophytic fungi from Radix Aconiti.
Key words：Radix Aconiti； Endophytic fungi； Isolation； Identification 川乌（Radix Aconiti），别名鹅儿花、铁花、五毒。该植物性热，味辛、苦；具大毒。其主要成分为双酯型二萜类生物碱，如乌头碱（Aconitum）、中乌头碱（Misaconitine）、次乌头碱（Hypaconitine）等。乌头碱具有强心、镇痛、抗肿瘤、调节免疫等的作用，临床上主要用于治疗恶性肿瘤、类风湿性关节炎、风湿性关节炎、痛风等慢性疾病。现代止痛新药多含有乌头类生物碱，对慢性疼痛的止痛效果并不低于西药，说明乌头类生物碱在缓解疼痛疾病方面已经引起临床医学的关注。与此同时，药理学研究还表明乌头碱在抗肿瘤方面也具有良好的临床应用前景［1］。 目前，植物内生菌的研究国内外已经成为热点领域，以往对川乌植物的研究主要针对植物化学成分的报道为多，而对该植物内生真菌的发现、种类组成、数量与分布和种群多样性及其代谢活性物质的研究报道至今未见。为此，我们对川乌植物内生真菌作了系统的研究，包括菌株分离、分类学地位、种群组成、数量与分布、代谢活性产物的分离等。本文就川乌植物内生真菌分离和分类鉴定的资源学方面研究报道如下。
1 材料。
1.1 植物样品活体植物川乌（Radix Aconiti）采自云南省会泽县大海乡中草药种植基地，海拔高度3 150 m。
1.2 培养基分离培养基：PDA培养基（马铃薯葡萄糖培养基），临用时每毫升培养基中加80单位的青霉素以抑制细菌生长。 分类鉴定培养基：PDA培养基和促孢培养基（KH2PO4，MgSO4·7H2O，KNO3，KCl，葡萄糖，蔗糖）。
2 方法。
2.1 内生真菌的分离首先用自来水冲洗净川乌植物的根、茎表面的泥沙，接着进行表面消毒［2］，切成0.3 cm×0.3 cm大小的片段种植在PDA培养基里，置于(28±1)℃的温箱中静止培养。培养3～12 d后，可见有菌丝生长，挑取植物组织周围的菌丝转接入PDA试管斜面，经纯化即得川乌植物内生真菌。
2.2 内生真菌的分类鉴定采用插片培养方法，对分离获得的内生真菌进行显微形态特征的观察、结合形态学分类方法，鉴定检索参照文献［3,4］。