痒宁颗粒提取工艺研究

[摘要] 目的 优选痒宁颗粒的最佳提取工艺条件。方法 采用单因素筛选法和正交设计法,进行提取工艺优选研究。结果 挥发油提取最优工艺条件为药材加8倍水,浸泡0.5 h,蒸馏6 h;水提取最优工艺条件为A3B3C2,即煎煮2次,加12倍水,每次煎煮2 h,结论 优选得到的提取工艺简单、稳定、可行。 毕业论文网 　　[关键词] 痒宁颗粒;提取工艺;苦参碱;氧化苦参碱;挥发油;正交实验 　　 　　痒宁颗粒的处方是由清代《医宗金鉴》中的消风散经加减化裁而成,由荆芥、防风、苦参、当归等13味药材组成,具有疏风养血,清热除湿等功效。临床证实具有较好的止痒作用,对湿疹、皮炎、骚痒症的皮肤病均有满意的治疗效果。现代医学证明,方中药材所含的挥发油及水溶性成分,具有解热、镇痛、抗过敏、抗菌、抗病毒等多种药理作用。为了保证制剂质量和临床疗效,实验采用单因素比较法和正交实验法,分别进行挥发油提取和水煎煮最佳工艺研究。 　　 　　1 仪器与试药 　　 　　1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪、二极管阵列检测器、二元泵、Agilent1100工作站(美国安捷伦公司);Bp211 d电子分析天平(德国, sartorius); RE52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);MYB型调温电热套(2 000 m,l浙江新华医疗器械厂); ZK82A真空干燥箱(上海市实验仪器总厂)。 　　1.2 试药 苦参碱和氧化苦参碱对照品,由中国药品生物制品检定所提供;痒宁颗粒所用药材均由广东广弘药业有限公司购得;所用化学试剂均为分析纯。 　　 　　2 方法与结果 　　 　　2.1 挥发油提取工艺优选 荆芥、防风、当归含挥发油,且诸成分具有多种药理作用[12],按照《中国药典》2005版中规定的水蒸气蒸馏法提取挥发油,采用单因素筛选法对影响挥发油提取的加水量、浸泡时间、蒸馏时间等因素进行优选。 　　2.1.1 加水量对收油率的影响 按处方比例取药材,加不同倍量的水,浸泡、蒸馏相同时间,比较收油率。见表1。 　　结果:加水量对收油率的影响较小, 加水量较少时长时间蒸馏易出现烧焦现象,采用加8倍水的方法。 　　2.1.2 浸泡时间对收油率的影响 按处方比例取药材4批,分别加8倍量的水,浸泡不同时间,蒸馏相同时间,比较收油率。见表2。 　　表2 　　2.1.3 蒸馏时间对收油率的影响按处方比例取药材3批,加8倍量的水,浸泡0.5 h,比较不同蒸馏时间的累积收油率。见表3。2.1.4 收油率验证实验 用最佳条件拟定挥发油提取工艺为加8倍量水,浸泡0.5 h,蒸馏6 h,重复3批,确定收油限量。见表4。 　　2.2 水煎煮工艺优选 　　2.2.1 因素水平的设定 根据本方中药材有效成分性质,影响水煎煮效率的主要因素有加水量、煎煮时间和煎煮次数,针对此三因素,苦参(苦参碱和氧化苦参碱含量为2.34%)中苦参碱和氧化苦参碱提取率为评价指标,选用L9(34)正交实验对其进行了优化研究,因素水平设计见表5。 　　2.2.2 样品的制备 按正交表所列各因素水平实验条件,称取苦参(处方中苦参药材量为20 g)等药材9份,分别加入提取挥发油后的药渣,按正交实验表L9(34)安排实验,进行提取工艺条件筛选。提取液分别加入提油后的水溶液,减压浓缩,真空减压干燥,得总水提取物干浸膏。 　　2.2.3 苦参碱和氧化苦参碱含量测定 　　2.2.3.1 色谱条件 色谱柱为NUCLEOSILNH2氨基键合硅胶柱;流动相为乙腈?∶?无水乙醇?∶?3%磷酸溶液(82?∶?10?∶?8);检测波长为220 nm;流速为1.0 ml/min;柱温为35℃。 　　2.2.3.2 对照品的制备 精密称取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量,精密称定,加乙腈?∶?无水乙醇(80?∶?20)溶解,分别制成含苦参碱36.4 μg/mL和含氧化苦参碱6.25 μg/mL的溶液,即得。 　　2.2.3.3 供试品溶液的制备 取干浸膏0.5 g, 精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨试液0.5 ml,精密加入三氯甲烷20 ml,密塞,测定重量,超声处理(功率250 W,频率33 kHz)30 min,放冷,再称定重量,用三氯甲烷补足减失的重量,摇匀,过滤。精密量取续滤液5 ml,通过中性氧化铝柱(100～200目,5 g,内径1 cm)依次以三氯甲烷、三氯甲烷?∶?甲醇(7?∶?3)各20 ml洗脱,收集洗脱液,回收溶剂至干,残渣加无水乙醇适量使溶解,并转移至10 ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。 　　2.2.3.4 测定法 分别精密吸取上述对照品溶液5 μl与供试品溶液10 μl,注入高效液相色谱仪,测定,计算干浸膏中苦参碱和氧化苦参碱总含量。见表6。 　　结果:由直观分析可知因素主次为加液量(A)>提取时间(B) >煎煮次数(C)。方差分析表明,因素A(加液量)对试验结果有显著影响,其余两因素有一定的影响。因此,提取工艺条件定为提取挥发油后的药渣与黄柏等10味药材,加水提取两次,每次分别加12倍量水,提取2 h,即A3B3C2。 　　2.2.4 苦参碱的提取率的测定 按下列公式计算苦参中苦参碱和氧化苦参碱提取率。见表6。 　　2.2.5 验证实验 　　按最佳工艺A3B3C2进行重复试验3次,结果表8。 　　 　　3 讨论 　　 　　根据上述试验,痒宁颗粒剂的最佳提取工艺可确定为荆芥、防风、当归提取挥发油,蒸馏后的水溶液另器收集,药渣与苦参等10味药材加水煎煮两次,每次加药材12倍量水,煎煮2 h。该工艺方法简单,适合工业化生产,经验证实验证明工艺稳定。 　　 　　参考文献 　　[1] 葛卫红,等. 荆芥、防风挥发油抗炎作用的实验研究. 成都中医药大学学报,2003,25(1):5557. 　　[2] 倪竹南,吕圭源,楼招欢,吴人杰. 当归挥发油化学成分和药理作用研究进展. 中国中医药信息杂志,2007,14(7):9395. 　　[3] 郑虎占,等.中药现代研究与应用.学苑出版社,1997.

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