氧化苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究
【摘要】 目的 探讨不同浓度的氧化苦参碱对人骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法将不同浓度的氧化苦参碱作用于培养的OS732 骨肉瘤细胞, 通过MTT 比色法、流式细胞仪和DNA 凝胶电泳、光学显微镜技术观察检测细胞凋亡, 研究分析其对骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果浓度为1.77，3.55，5.32mmoL/L的氧化苦参碱对OS732 骨肉瘤细胞相对抑制率分别为16.4%，29.0%，47.0%；流式细胞技术显示骨肉瘤细胞的凋亡率分别为11.8%，18.6%，27.7%；DNA 电泳见DNA“梯形”图谱；显微镜显示细胞的凋亡形态。结论 氧化苦参碱能显著抑制OS732 细胞增殖、促进其凋亡。
Abstract:ObjectiveTo study the growth—inhibitory effect and the mechanism on apoptosis induced by oxymatrine on OS732 osteosarcoma cells.MethodsOsteosarcoma cells were treated with oxymatrine for 3 days. The cyto— toxicity was observed by MTT assay. The apoptotic rates were shown by flow cytometry (FCM ). Electron microscopy and DNA gel electrophoresis were applied to demonstrate of the presence of apoptosis. ResultsWhen osteosarcoma cells were treated with oxymatrine (1.77, 3.55 and 5.32 mmol/L ) , the cytotoxicity indexes were 16.4% , 29.0% and 47.0% respectively, the apoptostic rates were 11.8%，8.6%，27.7%. The obvious apotosis morphological changes in osteosarcoma cells were shown by electron microscope. ConclusionOxymatrine is able to inhibit the proliferation and induce the apoptosis of OS732 cells significantly. It is a potential and valuable proposal for clinical treatment of osteosarcoma.
Key words:Osteosarcoma; Oxymatrine; Apoptosis。
氧化苦参碱(oxymatrine)是从豆科植物苦参、苦豆子中提取的有效成分，具有广泛的生物活性,其抗病毒、抗炎及对中枢神经系统的镇静、镇痛、解热、降温作用和强心、降压、抗心率失常、调节免疫功能已被广泛用于临床各科［1］。近几年，氧化苦参碱的抑瘤作用已逐步被证实。如氧化苦参碱诱导人乳腺癌细胞的凋亡［2］，对小鼠肉瘤S180的抑制作用［3］。
本实验选用不同浓度的氧化苦参碱作用OS732细胞，检测细胞凋亡的各项指标，为氧化苦参碱在抗肿瘤治疗方面提供一定的参考价值。
1 材料与方法。
1. 1 材料。
氧化苦参碱由宁夏紫荆花药业股份有限公司提供,纯度99.8%，批号20040402； 人骨肉瘤细胞株OS732 购自北京积水潭医院骨科研究所。RPMI l640 购自美国sigma公司。小牛血清购自杭州四季青生物工程有限公司。MTT试剂，美国Sigma 公司产品；流式细胞仪，美国Becton Dick in song 公司 ; 普通光镜，日本Olympus公司产品；5%CO2 孵箱，日本公司产品，型号cpd—1700。超净工作台，苏净集团安泰公司，型号：AIR;胰酶购自Gibco 公司。MTT 酶联免疫光电吸收仪，购自南京国营华东电子厂，型号DG— 3022A.
1. 2 方法。
1. 2. 1 细胞的培养。
将O S732 细胞置于含10% 小牛血清的RPM ll640 培养液，于37℃，5%CO2湿度100% 的培养箱孵育。维持细胞处于对数生长期，备用。
1. 2. 2 四氮噻唑蓝(MTT)比色法取指数生长期生长状态较佳的细胞, 经0. 25%胰酶消化后配制成浓度为1×105cell/ml 的细胞悬液,取96孔板, 每孔接种1×104 个细胞, 按氧化苦参碱浓度为1.77，3.55，5.32 mmol/L［2，4］作用于细胞,每浓度设5个复孔， 于第3 天 每孔加入MTT 溶液(5 mg/ml ) 30 μl，继续孵育4h, 终止培养,弃上清液, 每孔加入100 μl 二甲亚砜,振荡10 min, 选择570 nm 波长, 在自动酶联检测仪上测定各孔光吸收值(A),并计算其生长抑制率。