前列腺癌P504s、p63及34βE12的表达与Gleason分级的诊断意义
作者：张海萍， 钟山， 陈培琼， 郑菲。
【关键词】 前列腺肿瘤；,角蛋白；,消旋酶类和差向异构酶类；,免疫组织化学;,肿瘤标记,生物学。
摘要: 目的 探讨前列腺癌的病理形态学特征、Gleason分级及α甲酰基辅酶A消旋酶(P504s)、p63、34βE12联合标记在其诊断和预后中的应用价值。 方法 常规光镜观察71例前列腺癌患者的病理组织学形态并进行Gleason分级评分，应用免疫组织化学（SP法）检测P504s、p63、34βE12的表达。 结果 71例中，Gleason 2～4分11例，5～6分16例，7分16例，8～10分28例。P504s阳性表达率为97%（69/71），而p63和34βE12均不表达（0/71）。本组病例P504s、p63及34βE12在前列腺癌Gleason分组间的表达没有差异，与肿瘤的分化程度及生长方式也没有相关性。 结论 前列腺癌的病理诊断和Gleason分级评分主要是依据肿瘤的组织结构和形态学特征，Gleason分级与肿瘤的生物学行为和预后密切相关。P504s、p63、34βE12联合标记对前列腺癌的诊断和鉴别诊断有良好的应用价值。
关键词: 前列腺肿瘤； 角蛋白； 消旋酶类和差向异构酶类； 免疫组织化学; 肿瘤标记，生物学。
随着国内人均寿命的延长、饮食结构的改变和诊断技术的提高，我国前列腺癌的发病率逐年显著提高，且预后不良，因此前列腺的早期诊断对治疗和预后都至关重要。前列腺癌的诊断往往依赖于前列腺穿刺标本的病理检查，但由于活检标本取材有限、小而易于变形，仅仅靠光镜下的组织学形态有时很难鉴别，甚至造成误诊。目前分子生物学技术的发展已经证明，前列腺癌的发生、发展是多种癌基因和抑癌基因共同作用的结果，可以从蛋白水平和基因水平检测前列腺癌。近年研究发现，α甲酰基辅酶A消旋酶（P504s）在前列腺癌中具有高度特异度和敏感性，而p63、细胞角蛋白34βE12是目前基底细胞的可靠标记物[12]。为了在工作中更准确的认识和掌握前列腺癌的诊断，笔者通过对71例前列腺癌标本进行病理形态学观察、Gleason分级及免疫组织化学P504s、p63、34βE12联合标记，并结合临床情况探讨其相关性及诊断意义。
1 材料和方法。
1.1 材料 收集2000年5月～2006年2月经病理明确诊断为前列腺腺癌标本71例(包括手术切除标本17例、经尿道前列腺切除21例及穿刺标本33例)。患者年龄（70.20±7.56）岁（52～83岁）。临床主要表现为局部尿道受压或直接被浸润所引起的排尿困难、血尿以及局部疼痛症状，部分病例病灶较小、局部症状不明显，以转移症状为首发症状，少部分病例没有任何临床症状、体检或做其他检查时偶然发现。
1.2 方法。
1.2.1 常规病理观察 标本经4%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm切片，常规HE染色。镜下观察所有病理切片中前列腺癌的形态结构、排列方式、间质变化及肿瘤浸润情况。
1.2.2 免疫组织化学方法 采用SP法，抗体、试剂盒和DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司，按说明书进行免疫组织化学染色。用已知前列腺癌切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照，抗体包括P504s、p63及34βE12。
1.2.3 免疫组织化学结果判断 （1）P504s阳性信号定位于上皮细胞细胞质，呈棕黄色颗粒状。无着色细胞为阴性，着色细胞广泛分布为阳性；棕色颗粒稀少、细小为低表达，棕色颗粒密集，粗大为高表达。（2）p63阳性信号定位于基底细胞细胞核，呈深褐色颗粒，无棕色颗粒为阴性，有棕色颗粒为阳性。（3）34βE12阳性信号定位于基底细胞膜和细胞质，呈棕黄色染色为阳性，基底细胞缺乏无染色为阴性。
1.3 统计学处理 用SPSS 12.0统计软件进行χ2检验,P＜0.05为差别有统计学意义。
2 结果。
2.1 病理组织学特点及Gleason分级 前列腺癌大多有结构异常，最常见是出现大量体积明显小于正常腺泡的圆形、卵圆形或不规则形腺泡，这种小腺泡可以聚集成腺瘤样，但缺乏正常的分叶结构。肿瘤可以呈边界较清楚、大致圆形的膨胀性生长的结节，结节内腺体排列紧密，间质较少，但每个腺体是独立的不融合、无浸润（GleasonⅠ级）；或在GleasonⅠ的基础上表现为结节局部向周围组织的微小浸润，结节内腺体结构、大小较不一致（GleasonⅡ级）；也可以在间质内弥漫浸润性生长，且腺体保持独立，其中筛状、乳头状和肾小球样结构最有诊断意义（GleasonⅢ级，又分为Ⅲa、Ⅲb和Ⅲc）。部分通过腺体的共壁，搭桥形成片状的融合性腺泡群即分化不良的腺癌结构（Gleason Ⅳ级，分为Ⅳa、Ⅳb）。其中分化最差的是非腺性结构，指实性团块、条索或单细胞结构，这时肿瘤已完全不呈腺样结构，常伴有坏死（Gleason Ⅴ级，分为Ⅴa、Ⅴb）。因此，结构异常，尤其是以小腺泡增生为特征的结构异常是诊断癌的重要依据，但少数前列腺癌是以大腺泡为结构特征，部分病例可以见到直径≥2.5 μm的大核仁。除了少数GleasonⅠ级癌以外，所有前列腺癌都有不同程度的浸润，尤以正常腺泡之间的间质浸润、神经浸润、腺外脂肪和横纹肌浸润，该组病例在前列腺高分化癌中有4例出现腺腔内黏液样物（图1a）、3例见到棒状类结晶体（图1b）、3例细胞质透亮似肾透明细胞癌，又称为hypernephroid结构（GleasonⅣb）(图1c)，在低分化癌中常常伴有肿瘤坏死。本组病例Gleason评分/总分2~4分11例，5~6分16例，7分16例，8~10分28例。
A:腺腔内见到淡蓝色黏液样分泌物;B:腺腔内见到致密、嗜伊红的棒状类结晶体;C:细胞质透亮似肾透明细胞癌，又称为hypernephroid结构(Gleason Ⅳb).
图1 前列腺高分化癌（HE染色 ×200） （略）。
Fig 1 The high differentiating of prostate adenocarcinoma(HE staining ×200）。
2.2 免疫组织化学表达 P504s阳性表达率97%（69/71），均为高表达（图2），在5～6分及8～10分中各有1例不表达（1/16，1/28）。p63和34βE12在71例中均不表达（0/71）。本组病例P504s、p63及34βE12在前列腺癌Gleason各组间的表达没有明显差异，与肿瘤的分化程度及生长方式无相关性（P＞0.05）。