甲基对硫磷和毒死蜱对中肋骨条藻的联合毒性效应
【摘要】 采用水生毒理联合效应相加指数法，比较了有机磷农药甲基对硫磷和毒死蜱的单剂和混合剂对中肋骨条藻的急性毒性和联合毒性。结果表明:两种有机磷对中肋骨条藻的毒性大小为：毒死蜱 甲基对硫磷；两种有机磷混合溶液对中肋骨条藻的联合毒性 96h 内均为协同效应。
【关键词】 甲基对硫磷； 毒死蜱； 中肋骨条藻； 联合毒性。
毕业论文。
Study on the joint toxicity of methyl parathion and chlorpyrifos for skeletone macostatum (Grev.) Cleve。
【Abstract】 Using the addition method of index in aquatic toxicity, compared the acute and joint toxicity of methyl parathion and chlorpyrifos (single or complex) to Skeletone macostatum (Grev.) Cleve . The results showed that the toxicity of the organophosphorus pesticides(OPPs)to the mecroalgae is in the order of chlorpyrifos methyl parathion, and the two OPPS show synergism on thEir joint toxicity in 96 hrs to Skeletone macostatum (Grev.) Cleve. 论文代写。
【Key words】 methyl parathion; chlorpyrifos; skeletone macostatum; joint toxic action 毕业论文。
具有杀虫力强、适用范围广等特点的有机磷农药，在农业病虫害防治上起到了重要作用，但也不可避免地污染了周围环境，危害非靶生物。农药对海洋的污染，主要是通过施用时散落在田间的农药，随雨水等冲刷或工厂的“三废”排放造成的。这不可避免地对海洋生物造成危害。海洋微藻是近岸海域的初级生产者，是鱼、虾、贝的主要饵料生物，因此，开展有机磷农药对海洋微藻的毒性 研究 工作，对探讨有机磷农药污染对近岸海域初级生产力的 影响 具有重要意义。为此，国内外开展了大量的研究工作。中肋骨条藻属硅藻类，是渤海、黄海的优势藻种［1］，可作为饵料藻，已被证实是引发赤潮的主要藻种之一。甲基对硫磷和毒死蜱是我国北方沿海地区曾经或正在大量使用的有机磷农药，它们的分子结构式如图1所示。有关甲基对硫磷和毒死蜱对中肋骨条藻毒性效应的研究均未见报道。本文以中肋骨条藻以及甲基对硫磷和毒死蜱为研究对象，较为系统的研究了有机磷农药对海洋微藻的毒性效应。 论文网。
在联合毒性的评价和危险评价中，汝少国［2］等认为采用 48h 或 72h 的EC50值较为客观。这是因为，有机磷农药的 EC50 随培养时间、pH、实验条件等变化很大。一方面，随处理时间的延长，藻体繁殖增快，自身产生生物稀释效应［3］；另一方面，有机磷农药遇水易分解［4,5］，生成的降解产物对藻的毒性有较大变化。本文利用荧光光度仪测定微藻生长的 方法 ，研究了有机磷对微藻的毒理效应；采用 72h—EC50 作为评价指标。
图1 有机磷的分子结构式（略）。
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Figure 1 Molecular structure of Organophosphorus pesticides。
(a) 毒死蜱 (chlorpyrifos) (b)甲基对硫磷（methyl parathion） 论文代写。
1 实验材料。
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1.1 试剂 甲基对硫磷［国家农药质检中心（沈阳），纯度≥99.1%］；毒死蜱［国家农药质检中心（沈阳），纯度≥99.3%］。甲基对硫磷和毒死蜱分别用丙酮配制成1000mg/L的标准贮备液，置于4℃ 冰箱中保存。 毕业论文。
其他试剂包括丙酮、NaNO3、NaH2PO4·H2O、 Na2SiO3 ·9H2O、 FeCl3·6H2O、Na2EDTA·2H2O、CuSO4 ·5H2O、Na2MoO4·2H2O、ZnSO4·7H2O、CoCl2·6H2O 、MnCl2·4H2O、Vitamin B12、Biotin、 Thiamine·HCl均为 分析 纯（上海化学试剂公司）。
实验用水为用 Millipore Milli—Q50（Millipore Corp., Waltham, MA, USA）新鲜制备的去离子水（18MΩ）；海水采自青岛石老人近岸，经 0.45μm玻璃纤维滤膜过滤，高温灭菌。 论文网。
1.2 仪器设备 Hitach F—4500 荧光分光光度计（日本岛津公司）；磁力搅拌器（常州国华电器有限公司）；EZ—Dry Kinetic 冷冻干燥机（美国）；AJ100 型 电子 天平（Mettler—Toledo 公司，瑞士）；Milli—Q50超纯水处理系统（Millipore 公司，美国）；TOMY Autoclave SS—325 高压灭菌锅（TOMY 公司，日本）；LRH—250G 光照培养箱（广州医疗器械厂）；Nikon Alphaphot YS 型显微镜（Nikon，日本）。 代写论文。
2 实验方法。
2.1 藻类的培养及有机磷的投加 中肋骨条藻(Skeletone macostatum (Grev.) Cleve)由中科院海洋所微藻室提供，培养温度为 （25±1）℃ ，光强 3500 Lux，光暗周期昼/夜为12h∶12h，培养液为 f / 2 培养液，所用海水取自青岛近岸石老人的天然海水，经孔径 0.45μm 的玻璃纤维滤膜过滤，煮沸消毒。实验使用 250ml 的三角瓶，实验体积 200ml，每处理组3个平行样。接种前，先加入相应实验浓度的有机磷标液，平衡24h，以消除器壁对有机磷的吸附。接种后，立即取样，分别进行荧光光度法和气相色谱法的测试，以后每隔 24h 取样。在培养期间经常摇动三角瓶，实验重复 3次。实验所用器械均经高压蒸锅灭菌。 论文网。
2.2 藻类生物量的测定 论文网。
2.2.1 藻细胞浓度—藻液荧光光度标准曲线 取高浓度的藻液，用超纯水按浓度减半的原则稀释成一定的浓度梯度，每份样品分别用血球计数板计数和进行荧光测试，根据实验结果，绘制相应的对照曲线。 论文网。
2.2.2 血球计数板法 藻细胞密度的测定，以 Lugol 碘液固定样品，显微镜下血球计数板计数，每个样品重复3 次。
2.2.3 荧光光度法 在激发波长 466nm时，扫描600～730nm范围，以 679nm 处发射峰进行定量分析。 论文网。
2.2.4 荧光光度法与细胞计数法实验结果对照 接种当天测定藻液在 679nm 处的发射峰高度，然后每隔 24h 测定一次，从藻细胞浓度—藻液荧光光度标准曲线查出对应的藻细胞浓度。 毕业论文。
论文代写。
2.3.1 单一有机磷对两种海洋微藻的急性毒性效应 在预备实验的基础上，设置0.1mg/L、0.5mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L 共5个浓度组，每一组有两个平行样，并设 1个对照组。在 250ml三角瓶中加入150ml同一批藻液，藻液的初始密度为4.88×104个/ml。藻类生长死亡情况用 Hitach F—4500型荧光光度计，在激发波长为 466nm时，测定679nm处的波长。同时也用显微计数法进行直接测定，以作对照和比较。分别在 24、48、72 和 96h 取样分析，按公式（1） 计算 其相对生长率，再以浓度的常用对数为横坐标，抑制百分率的概率单位为纵坐标绘制生长效应曲线，算出半数有效浓度 EC50。K=lgNt—lgN0 T （1）其中：Nt：培养ｔ时刻的细胞密度；N0：起始细胞密度；T：为培养时间（d）；K：相对生长率。 代写论文。
2.3.2 联合毒性实验 在单一毒性实验的基础上，按甲基对硫磷∶毒死蜱浓度比为1∶1进行5个浓度组的急性毒性实验。每个实验组设两个平行样，分别记录 24、48、72 和96h 藻类生长死亡情况。 论文网。