高效液相色谱内标法测定新疆各地鲜蒜中蒜氨酸的含量
作者：唐辉，陈坚，王鲁石，景文娟，艾波。
【摘要】 目的调查新疆各地鲜蒜中蒜氨酸含量，评价鲜蒜品质，判断药用大蒜来源。方法对地区多点采样，以微波方式灭酶并采用高效液相色谱内标法进行鲜蒜中蒜氨酸含量测定。结果新疆各地大蒜中蒜氨酸含量范围从0.657%～2.474%。结论新疆大蒜蒜氨酸含量普遍较高，差异较大。
Abstract:ObjectiveTo investigate the alliin content from fresh garlic in Xinjiang and to evaluate the quality of fresh garlic so as to estimate the source of garlic for pharmaceutical application. MethodsTo collect samples from various spots in different areas. After an disposal of microwave for allinase deactivation，alliin in fresh garlic was determined by HPLC with internal standard substance. ResultsThe content range of alliin was 0.657%～2.474%. ConclusionThe contents of alliin in garlic of Xinjiang are universally high, but the differences are relatively remarkable.
Key words:HPLC with internal standard ； Alliin。
百合科葱属植物大蒜Allium Sativum Linn为多年生草本植物。大蒜作为药用植物，除抗菌、消炎外，尤其对于几种癌症和心脏血管失调具有特殊预防和治疗作用［1］。中医典藉(唐)《新修本草》、(元)《食物本草》、(明)《本草纲目》等记载，大蒜原名“葫”及“胡蒜”，汉朝时由张骞传入内地。经考证，大蒜的原产地在中亚，包括我国新疆［2，3］。由于气候适宜、光照充分、无工业污染等原因，其医药功效成分含量高， 被国际市场称为“高蒜氨酸大蒜”而成为大宗出口商品。对大蒜及其制品的研究十几年来成为国际研究的热点［4］。对新疆各地大蒜中蒜氨酸含量进行调查，有助于判断优质药用大蒜原料来源。
大蒜对健康有益的功效成分是含硫化合物，特别是蒜氨酸(alliin)和蒜酶(alliinase)的反应产物——蒜辣素(allicin) ［5］。蒜氨酸和蒜酶处于细胞的不同结构部位，蒜氨酸以稳定、无臭的形式在细胞质中，而蒜酶存在于液泡中。当挤压和破碎大蒜鳞茎，细胞被破坏时，蒜酶从隔间释放，便同蒜氨酸接触，发生蒜氨酸的酶解反应，使蒜氨酸转化为有特殊气味的蒜辣素，它非常不稳定，迅速降解为相关的有机硫化物，如（聚）硫化物、乙烯基二硫化物或蒜烯［6］，因此测定其含量条件要求较高，误差较大［7～9］。
有关大蒜品质的评价现在大多由活性成分蒜辣素的前体物质——蒜氨酸含量作为指标，本文报道的方法不需衍生化，采用HPLC内标法定量，操作简单， 较黄雪松［10］、常军民等［11］采用的外标法结果更准确。调查结果发现，各地蒜氨酸含量普遍较高，均远远高于《美国药典》0.5%的标准，新疆地域宽广，具有生态多样性，环境差异很大，即使同一地区生长大蒜的蒜氨酸含量也存在明显差异，大蒜品质主要受生境、气候、土壤及水肥的影响较大。
1 材料与试药。
1.1 原料。
1.2 仪器。
美国Agilent 1100高效液相色谱仪，HP 化学工作站，上海安亭TDL408低速大容量离心机，北京天鹏超声波提取器，德国SartoriusBP211D十万分之一电子天平，广东顺德惠而浦微波炉，上海安亭TGL16G高速台式离心机等。
1.3 试药。
蒜氨酸对照品为自制（纯度95%），利巴韦林（常州第三制药厂20050923），液相用甲醇为色谱纯，水经重蒸。
2 方法与结果。
2.1 样品的处理。
精密称取新鲜去皮大蒜10.0 g，中高火微波（2 450 MHz）1 min，加水30 ml，打浆，将样品糊转移至离心管中，超声10 min后离心（4 000 r/min，10 min），上清液转移至100 ml容量瓶中。沉淀加水30 ml，摇匀，再次超声、离心2次，上清液合并至上述100 ml容量瓶中，用水定容至刻度，成储备液。
2.2 供试液的配制。
分别精密量取上述储备液2.0 ml置于25 ml容量瓶中，加入2.0 ml内标液（利巴韦林，0.376 5 mg/ml），水稀释并定容至刻度。
2.3 色谱条件。
DIKMA DiamonsilTMC185 μm(250 mm×4.6 mm)；柱温：25℃； 流动相：水100%；检测波长：220 nm； 流速：0.8 ml/min；进样量：20 μl。甲醇为色谱纯,水为高纯水。