反相高效液相色谱法测定冬凌草中乌索酸和齐墩果酸的含量

【摘要】 目的建立反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定冬凌草中乌索酸和齐墩果酸的含量。 方法 色谱柱为NUCLEODUR C18 RP柱(250 mm× 4.6 mm, 5 μm)；流动相为甲醇水(87∶13)；流速0.8 ml·min—1，光电二极管阵列检测器，检测波长210 nm，柱温25 ℃。结果在选定色谱条件下线性范围良好，乌索酸和齐墩果酸的样品加样回收率分别为96.2%和98.7%，RSD为1.9%和0.9%。结论该方法快速简便，结果准确可靠。 毕业论文。

【关键词】 冬凌草； 乌索酸； 齐墩果酸； 反相高效液相色谱； 含量测定 代写论文。

基金项目：国家“863”计划重点资助项目。

Abstract：ObjectiveTo develop a quantitative method for determination of ursolic acid and oleanolic acid in Rabdosia rubescens by RPHPLC. MethodsHPLC was carried out on NUCLEODUR C18 RP column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) at 25℃ using methanolwater (87∶13) as mobile phase with a flow rate of 0.8 ml·min—1 and detection wavelength was at 210 nm. Results The good linear relationship was obtained under the optimum conditions. The recoveries of the standards added for ursolic acid and oleanolic acid were 96.2 % and 98.7%, respectively, while the relative standard deviations were 1.9 % and 0.9%.ConclusionThe method is rapid and precise. 论文网。

Key words：Rabdosia rubescens; Ursolic acid; Oleanolic acid ; RP—HPLC; Content determination 　　冬凌草为唇形科香茶菜属植物碎米亚Rabdosia rubescens (Hemsl.)Hara的干燥全草，广布于黄河、长江流域，主产地在河南济源太行山一带。冬凌草味甘、苦，性微寒，具清热解毒，消炎止痛，健胃活血及抗肿瘤之功效［1］。用于 治疗 咽喉肿痛、扁桃体炎、蛇虫咬伤及食管癌、贲门癌、肝癌、乳腺癌等。临床实验证明冬凌草对食管癌、贲门癌、肝癌等有一定疗效，对食管上皮增生有显著疗效［2］。1991年我国卫生部批准将其干燥叶及地上部分作为中药材，收入部颁中药材标准。冬凌草中的主要有效成分为冬凌草甲素、冬凌草乙素、乌索酸和齐墩果酸。近年药理 研究 表明,不仅冬凌草甲乙素具有很强的抗癌作用,乌索酸和齐墩果酸也具有一定的抗肿瘤活性［3～5］。笔者采用反相高效液相色谱法同时测定了不同产地冬凌草中乌索酸和齐墩果酸的含量，为控制药材质量提供依据。 论文代写。

1 仪器与材料 　　Waters高效液相色谱仪（515泵，2996光电二极管矩阵检测器，7725I 进样阀，Empower 中文色谱工作站），ROMB10D高纯水机（杭州永洁达膜分离设备厂），CP225D 分析 天平（德国Sartorius公司），FW100型高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司），20226A型数显电热恒温干燥箱（上海阳光实验仪器有限公司），KS1500超声提取仪器（宁波科盛仪器厂）。 　　甲醇为色谱纯（色谱纯，上海陆忠试剂厂），水为高纯水，95%乙醇（分析纯，江西同盟试剂化工厂），乌索酸和齐墩果酸对照品（ 中国 药品生物制品检定所提供，批号110742200314，110709200304，供含量测定用）。冬凌草(市售，购自樟树药材市场)，经本所生药室鉴定为唇形科香茶菜属植物碎米亚Rabdosia rubescens(Hemsl.)Hara的干燥叶和地上部分。 代写论文。

2 方法与结果 论文网。

2.1 溶液的制备 代写论文。

2.1.1 对照品混合溶液的配制精密称取乌索酸和齐墩果酸对照品3.22 mg和1.28 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成对照品混合溶液，备用。 论文代写。

2.1.2 样品溶液的配制取冬凌草样品于60℃恒温干燥8 h，粉碎，精密称取约3 g，加入95 %乙醇溶液40 ml，超声提取120 min，冷却至室温，滤过，滤渣洗涤2次，合并滤液于50 ml容量瓶中，乙醇定容，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，得样品溶液。 代写论文。

2.2 检测波长的确定取乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液进样，在190～500 nm波长范围进行光谱扫描，其在流动相中的最大吸收波长均为203.4 nm (图1)，但由于流动相在短波长处有末端吸收，为了减少干扰，提高信噪比，提取不同波长的色谱图进行比较，选择210 nm为检测波长信噪比高，峰形好，基线平稳［6］。 论文网。

2.3 色谱条件色谱柱为NUCLEODUR C18 RP柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇水（87∶13，V/V）；流速0.8 ml·min—1；检测波长210 nm；柱温25°C，进样量10 μl。乌索酸和齐墩果酸 理论 塔板数均大于10 000，分离度大于1.5。乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液及冬凌草样品溶液的HPLC色谱见图1。

图1 乌索酸和齐墩果酸对照品紫外光谱（略）。

论文网。

2.4 线性关系实验分别精密吸取对照品混合溶液1.0，5.0，10.0，15.0，20.0 μl，按选定的色谱条件进样并测定峰面积。以峰面积（μV·s）对进样量（μg）进行线性回归，乌索酸和齐墩果酸的回归方程分别为： 论文网。