高效液相色谱法测定血浆中咪达唑仑浓度

【摘要】目的:建立测定血浆中咪达唑仑浓度的反相高效液相色谱法。方法:以地西泮为内标采用C18柱及保护柱，流动相为甲醇一水（60：40V/V）含腈1%、二乙胺0.1%，磷酸0.05%；流速为0.6mLmin—1；提取液为乙醚，采用紫外检测，检测波长为225nm。结果： 咪达唑仑与内标分离良好，保留时间分别为（11.21±0.58）min和（9.41±0.39）min；咪达唑仑在0.1~2.0ug. mL—1范围内线性良好。回归方程为Y=9×10—4X－9.17×10—2，r =0.9998；日内及日间变异＜6%；最低检测浓度0.05 ug mL—1结论：本方法定用子咪达唑仑的药动学和药效学研究。 毕业论文网 　　【关键词】 咪达唑仑高效液相色谱法血药浓度 　　【中国分类号】R969【文献标识码】A【文章编号】1044—5511（2011）11—0491—01 　　 　　咪达唑仑（咪唑安定）是一个短效的水溶性苯二氮卓类药物，是咪唑苯二氮卓衍生物之一。与地西泮的油溶液相比，水溶性可将注射疼痛及血栓性静脉炎的发生降低到最小，咪达唑仑常于手术局麻时作为镇静催眠药，较高剂量则用于全身麻醉诱导剂［1］由于其较短的消除半衰期（1.5~2.5h）［2］,并且临床上缺乏理想的长效制品，这就使咪达唑仑更适合作为镇静剂长时间推注。值的注意的是，在使用高剂量作诱导麻醉时，在反应上有个体差异，有资料显示，给予咪达唑仑0。3mg.kg—1iv，从开始给药致意识丧失的时间存在着个体差异，50a以上患者意识丧失比年轻人快［1］，本文采用高效液相色谱法测定血浆中咪达唑仑的方法，为临床进一步研究其血药浓度与药效学之间的关系，探索合理有效的给药剂量提供一定帮助。 　　1 材料与方法 　　1．1仪器与试药waters515HPLC pamp；waters2487紫外检测器；杭州英谱HS色谱数据工作站；80—2离心沉淀相，咪达唑仑水针剂（江苏恩华制药有限公司，批号B363MFD191998）；地西泮（北京益民制药厂，批号9801017）甲醇（HPLC，上海吴泾化总厂）；二乙胺（上海化学试剂总厂附属上海试剂三厂）乙腈（HPLC级，上海方可唯寄生物化学技术有限公司）；乙醚、磷酸均为分析纯。 　　1．2溶液配制：咪达唑仑溶液精取咪达唑仑水针剂1mL，量100mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成0.05mg.mlL1的标准溶液备用，地西泮内标溶液，精称地西泮10mg置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，制成0.1 mg.mL—1的内标溶液备用。 　　1.3色谱条件: 色谱柱：waters Nov—pak G18（4um.3.9mm×150mm）；Alltech保护柱C1830μn。检测波长：225nm。灵敏度：2AUFS。流动相：甲醇一水（60：40，V/V）,含乙腈1%、二乙胺0.1%、磷酸0.05%。流速：0.6 mL.min—1。 　　1.4样品预处理：取含有咪达唑仑的人血清0.5mL。置于10mL具塞试管中，加地西泮内标溶液5uL，涡旋混和加3mol.L—1Naoh溶液0.5mL，涡旋振荡，加提取液乙醚3mL，涡旋振荡2min，以4000r. min—1转速离心分离2 min，取上层提取液重复提取一次，合并提取液，以40℃氮气吹干，加甲醇50μL回提，取回提取液20μL进样。 　　2、结果 　　2．1咪达唑仑及内标色谱，用上述提取方法及色谱条件得到血清色谱图见图1显示咪达唑仑与内标峰完全分离，保留时间分别为（11.21±0.58）min和（9.41±0.39）min见图Ⅰ 　　2．2标准曲线取人血清0.5mL,加适量标准液，配成浓度为0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2. 0ug.mL—1的标准血清，加地西泮内标液5μL，按上述提取方法及色谱条件进行测定。以咪达唑仑浓度为χ轴，以测定的咪哒唑仑与地西泮的峰面积比为Y轴进行线性回归。结果表明，样品在0.1~0.2 ug.mL—1范围内线性良好，回归方程为：Y=P×10—4X－9.17×10—2，r=0.9998。最低检测浓度为0.05 ug.mL—1。 　　2.3精密度及回收率.日内精密度及回收率:在同1d内配置3种不同浓度咪达唑仑的血清样品,按上述方法提取,分别测定5次,计算的内平均浓度,RSD及相对回收率,结果见表Ⅰ。 日间精密度及回收率：取3种不同浓度的咪达唑仑血清样品分别在3d内提取，测定结果见表Ⅰ 　　 　　3 讨论 　　咪达唑仑的化学名为8—氯—6—（2—氟苯）—1—甲基—4H—咪唑［1.5—a］［1.4］苯丙二氮卓，以盐酸或马来酸盐形式存在。本方法根据其结构特点，先碱化使其以分子形式存在，再用有机溶剂提取，挥干后以甲醇回提。用分析纯的乙醚提取，杂质峰多选用蒸溜乙醚提取后，减少了杂质峰的干扰，而且乙醚来源易的，价廉毒性较低。流动相的摸索过程中，先后选用了不同配比的甲醇和水作为流动相，发现甲醇一水（60：40V/V）含乙腈1%，磷酸0.05%的比例较好,但咪达唑仑和内标峰分离不太理想,峰型稍有拖尾,加入二乙胺期望改善峰形。经比较含二乙胺0.1%流动相能使内标峰和咪达唑仑峰完全分离,且峰形致改善。 　　碱化过程中,先后对不同浓度的Na oH及不同用量作了比较,发现无明显差别为保证咪达唑仑碱化完全,我们选用了3mol.L—1NaoH,,用量以0.5mL为宜. 　　本文用高效流相色谱法测定血清中咪达唑仑的浓度,提取方法简便,提取溶剂,流动相价廉易的,毒性低,方法线性良好重现性理想,适合临床进行诱导麻醉剂量的探索研究及药动学的研究. 　　 　　参考文献 　　［1］Dandee jn,Haliday Nj Harper KW et al Midaxolam;areview of its Pharmacological properties and therapeutic use［1］Drags 1984.28 519 　　［2］刘锡钧 实用药物指南［M］北京，人民军医出版社2000.120。

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