海水在组织制片过程中的应用研究
【摘要】目的：探讨海水在病理组织制片中应用的可行性、可靠性。
方法：应用人体手术切除的正常组织、炎性组织和肿瘤组织标本进行常规石蜡切片，然后用海水漂片、洗片，HE常规染色，光镜学显微镜观察。
结果：经海水漂片和洗片的组织切片，着色鲜艳，组织结构清晰，细胞形态完整，与常规方法无明显差异。
结论：海水可用于病理组织制片，且操作简单，结果可靠，有重要的军事意义。
【关键词】海水组织制片应用研究 ApplicationResearchofUsingSeawaterinSlicemaking Abstract:ObjectiveToexplorethefeasibilityandreliabilityof.MethodsHumennormalinflammatoryandtumortissueslicewerefloatedintheseawater,routinelydyed,observedwithoptioamicroscope.ResultsThecolorofsliceswasbright,thebasicorganizationalstructureswereclearandcellpatternswereintegrity.Therewasobviousdifferencebetweenthismethodandconventionalmethods.ConclusionApplicationofseawaterinpathologicalslicemakingwasfeasible,operationwassimpleandthearereliable.Thereisvitalmilitarysingficanee. Keywords:Seawater;Slicemaking;Appliedresearch 现代高科技条件下，多种兵器和多种作战形式综合运用是未来战争的主要特征，一旦发生战争，众多的军民将受到伤害，其致伤因素多变，伤员的伤情伤类复杂，“白金”时间诊断出伤情伤类，是军事病理工作者研究的任务之一。
因此，依靠自然、利用自然，探索特殊条件下军事病理技术的制片方法，对提高高科技条件下快速救治伤员、减少伤亡、降低伤残率和后遗畸形、提高部队战斗力具有重要作用。
近年来，我们将海水应用到组织制片技术中，并与常规制片方法作对比性研究，取得了令人满意的效果，现将方法介绍如下。
1材料与方法 1.1材料 取于南海离海岸2.5km处的海水，存于4℃～8℃冷室，用时恢复室温，用pH计测定pH值。
实验组织：用人体手术切除的正常组织、炎性组织和肿瘤组织标本，经常规处理的石蜡连续切片、冰冻切片和细胞学抹片。
试剂：苏木素、伊红染液等。
1.2实验与方法 每一蜡块和冰冻组织各切片两张，细胞学抹片两张，一张按常规方法进行染色，作为实验参照；另一张按下列步骤进行操作：石蜡切片在45℃（依石蜡溶点作调整）恒温海水中漂片后烤片8min～10min，经二甲苯脱蜡至95％乙醇；冰冻切片烤片后固定1min～2min；细胞抹片自然干片后固定10min；海水中洗涤；入苏木素染3min；盐酸酒精分化；海水中洗涤；返蓝，入返蓝液数秒或者直接入海水中洗涤15min；95％乙醇洗后入伊红液30s～1min；95％乙醇、无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光学显微镜下观察。
1.3观察指标 从细胞形态、细胞质、细胞核、核膜、核仁、染色质、细胞界限、血管及纤维等的着色、清晰情况进行评诂。
2结果 2.1冰冻切片组 正常组织、炎性组织和肿瘤组织的细胞质呈桃红色，细胞核呈蓝紫色，结缔组织呈粉红色，肌肉呈深红色，黏液呈蓝色，血管呈粉红色。
着色较鲜艳，组织结构基本清晰，细胞形态较完整，组织中央与边缘其细胞均显示良好的组织形态结构，大部分组织的冰冻切片染色与常规冰冻切片染色比较差异无显著性，某些组织（如：乳腺、淋巴结等）的冰冻切片质量优于常规方法（见图1～图2）。
2.2细胞学抹片组 细胞核呈鲜明蓝色，黏液呈灰蓝色，细胞浆呈不同程度粉红色至桃红色，红细胞呈橘红色，与常规方法无差异（见图3～图4）。
2.3石蜡切片组 正常组织、炎性组织和肿瘤组织细胞质呈桃红色，细胞核呈蓝紫色，结缔组织呈粉红色，肌肉呈深红色，黏液呈蓝色，血管呈粉红色，细胞界线明显，着色均匀，蓝红相映，胞核鲜明，核膜及核染色质清晰可见，血管、纤维清晰，与常规方法无差异（见图5～图8）。
3讨论 HE(HematoxylinandEosin)染色方法是生物学尤其是医学领域中的组织学、病理学及细胞学工作必不可少的最基本染色方法，广泛应用于基础、临床、科研和军事病理学工作中，具有重要的价值［1］。
尽管其原理尚未清楚，化学学说和等电点原理易被人们接受。
在HE染色中，其原理简单地说就是具有酸性的细胞核被碱性的苏木素所染色，碱性的胞浆被酸性染料伊红所染色［2］，从这一原理不难看出，染液的pH值对染色作用有着极为密切的重要关系。
当染液的pH值过低时，细胞核的着色差；当伊红染液的pH值过高时，胞浆的着色差，因此控制好染液的酸碱度是获得优质染色切片的前提。
在染色前和染色后，组织片水洗的目的是为了使切片清洁，提高切片质量，使切片着色均匀，防止不清洁的切片污染染液，保持染液的清洁和纯度，提高染液的使用率［3，4］。
我们用海水来洗涤切片，在染色前洗涤是洗去切片中的乙醇，便于组织细胞与染液中的色素结合。
海水是一种复杂的天然溶液，含盐度一般为3.1％～4.3％，化学成分以NaCl为主，含有钠、镁、铜、钾、铝、锌、锶等80多种元素，深水区海水的pH值在8.0～8.4之间［5，6］，由于工业污染物和潮间带的固着藻类分泌出来的酚类化合物浓度较大，离海岸越近，其pH值越低，我们测定南海海岸边海水的pH值仅为6.1，由于杂质较多，直接洗片时，海水中的杂质粘附于组织片上，严重影响镜下观察，因此必须沉淀后过滤才能用于洗涤切片，因pH值低，没有促蓝作用。