人尿道狭窄瘢痕组织中胶原蛋白含量和转化生长因子β1的表达及意
作者：程伟，孙润芹，呼冬利，赵世平。
摘要：目的 探讨人尿道瘢痕组织中胶原蛋白含量和转化生长因子β1(TGFβ1)的表达及其意义。方法 应用免疫组织化学SP法和VG染色方法检测了16例尿道狭窄患者及6例正常人尿道组织中的TGFβ1表达和胶原蛋白含量。结果 尿道狭窄瘢痕组织中TGFβ1蛋白表达较强，阳性表达率100%，且其表达主要集中在瘢痕成纤维细胞、巨噬细胞及血管内皮细胞的胞浆和胞膜；而正常尿道组织中TGFβ1表达较弱，阳性表达率仅为33.3%。两组比较差异有显著性(P0.05)。VG染色结果显示尿道瘢痕组织中胶原纤维染色密集，成束状排列；而正常尿道组织胶原纤维染色淡，成网状排列。结论 TGFβ1和胶原蛋白与尿道瘢痕形成关系密切，抑制TGFβ1过度表达将有助于预防和减轻尿道狭窄的发生。
关键词：尿道瘢痕；转化生长因子β1；胶原蛋白；免疫组织化学。
尿道狭窄是泌尿外科的常见病，其临床治疗是一大难题，目前仍未走出狭窄扩张/手术再狭窄的病理过程。为了探讨尿道狭窄的形成机制，我们采用免疫组织化学技术和VG染色方法检测了正常人尿道组织和尿道狭窄患者瘢痕组织中转化生长因子β1(transform growth factorβ1, TGFβ1)的表达和胶原蛋白含量，探讨其在尿道狭窄形成过程中的作用及意义。
1 材料与方法。
1.1 一般资料 收集1994年—2004年我院收治的16例尿道狭窄患者的手术标本。患者均有外伤史，病程3个月—3年，其中4例为经尿道内切开术后再狭窄患者。6例正常尿道组织取自尸检标本。全部标本用10%(体积分数)甲醛溶液固定，石蜡包埋后5μm厚连续切片，分别作HE和VG染色。
1.2 免疫组织化学染色 第一抗体兔TGFβ1多抗为Santa Cruz公司产品，SP试剂盒为Zymed公司产品。采用SP法，严格按照试剂盒说明操作。主要染色步骤：切片常规脱蜡至水；H2O2 灭活内源性过氧化物酶；微波修复抗原；正常山羊血清封闭；滴加多克隆兔抗人TGFβ1抗体，4℃过夜；滴加生物素化二抗及SP复合液，37℃孵育10—30min；二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。用已知TGFβ1阳性切片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液(PBS)分别代替一抗、二抗及SP液作阴性对照。阳性细胞评定标准：以细胞膜和(或)细胞浆染成棕黄色为阳性细胞。细胞的着色强度可分为以下级数：(—)为阴性细胞；(+)为细胞膜和(或)细胞浆染成淡棕黄色；()为深棕黄色；而()则介于两者之间。应用VIDAS图像分析仪，对各组切片单位面积阳性细胞数进行定量分析。
1.3 胶原纤维的面密度测定 由同一专业技术人员在单盲、同一设定条件下，利用计算机辅助病理图象分析系统测定胶原面积，以此数据作为胶原蛋白定量分析结果。VG组织切片染色结果，胶原纤维显鲜红色，肌纤维、胞质及红细胞黄色，胞核蓝褐色。在正常组织和瘢痕组织标本四角和中央位置，随机选取5个视野，测定红色之胶原纤维面密度，计算平均值。
1.4 统计学处理 实验数据用均数±标准差(±s)表示，采用χ2检验，以P0.05为差异有显著性。
2 结 果。
2.1 尿道瘢痕组织与正常尿道组织中TGFβ1的表达 TGFβ1在尿道狭窄组织中的表达较强(图1A)，主要集中在瘢痕成纤维细胞、巨噬细胞及血管内皮细胞的胞浆和胞膜。本组16例标本中9例TGFβ1表达为()，7例表达为()，TGFβ1阳性表达率为100.0%；正常尿道组织中TGFβ1表达较弱(图1B)，本组6例标本中2例表达为(+)，4例表达为(—)，阳性表达率为33.3%。两组比较差异有显著性(P0.05)。