外燥对小鼠气管细胞凋亡与bcl—2基因及bax基因表达的影响
作者：丁建中， 龚权， 陈刚， 李军川， 陈庭煊， 李侃、。
毕业论文。
【关键词】 外燥；,,bcl—2基因；,,bax基因；,,细胞凋亡 毕业论文。
摘要：目的观察外燥对小鼠气管细胞凋亡与bcl—2基因及bax基因表达的 影响 。 方法 30只昆明种小鼠随机分为常温常湿组（A组），温燥组（B组），凉燥组（C 组），每组10只。经处理后第14天用免疫组化法检测各组气管细胞凋亡率（%）、bcl—2、bax阳性指数（PI，%）、bcl—2/bax累积阳性指数（AI，%）与bcl—2:bax蛋白表达比值。结果3组小鼠气管细胞凋亡率均≤0.3%；B组与C组 bcl—2 PI与AI均低于A组（P0.01)，B组、C组气管细胞bcl—2:bax蛋白比值中bax增加。结论外燥致气管细胞bcl—2表达降低、bcl—2:bax蛋白比值改变，bcl—2、bax 阳性细胞以气道炎性病灶或纤毛缺损处多见,提示与外燥分子致病机制有关。 论文网。
关键词：外燥； bcl—2基因； bax基因； 细胞凋亡 论文代写。
Abstract：ObjectiveTo investigate apoptosis and expression of bcl—2 gene,bax gene in respiratory intraepithelium of mice with outer—dry.Methods30 kunming mice were divided into three groups, including group A(normal mice),group B(warm—dry mice),group C(cool—dry mice)，10 mice/group. Expression of bcl—2 gene,bax gene and apoptosis were measured on the 14th day.Results The re was no significant difference for apoptosis among the three groups. Bcl—2 PI and AI in group B and C were markedly reduced compared with group A(P0.01),and bax gene increased in the ratio of bcl—2:bax protEin.ConclusionOuter—dry can decrease the expression of bcl—2 gene, change the ratio of bcl—2:bax protEIn. 毕业论文。
Key words：Outer—Dry; Bcl—2 gene; Bax gene; Apoptosis 细胞凋亡是细胞接受某种信号后的一种由基因控制维持组织细胞动力学平衡的生理性死亡过程。bcl—2基因、bax基因在疾病机制 研究 中倍受关注，细胞增殖与凋亡平衡的实质可能是中医阴阳在细胞水平上的表现［1］，分子生物学 理论 与技术成为探析中医病因病机的新方法之一 。近年来从气象因素、生物致病因子和机体反应性等研究六淫中风、寒、湿、火（热）等病邪,有的已达分子水平［2］，但对燥邪病因病机研究较为滞后。课题组的相关研究结果显示，外燥致小鼠气道分泌功能障碍、气管上皮鳞状化生与炎性细胞浸润等病变。本文研究外燥对小鼠气管细胞凋亡与bcl—2基因、bax基因表达的影响，为外燥分子致病机制积累资料。 论文网。
1.1 动物 昆明种小鼠（SPF级）30只，体重(18±1) g，雌雄各半，湖北省实验动物研究中心提供，许可证号：SCXK（鄂）2003—2005。 毕业论文。
1.2 仪器与试剂 人工智能气候箱（LRH—250，温度：(30~65±1)℃，相对湿度：(30%~90%)±5%，广东医疗器械厂，LG风扇程控仪（MASTER—K30H,韩国），光学显微镜（Laica,德国），图像 分析 系统（HPISA—1000,华中 科技 大学同济医学院提供）。TUNEL试剂盒（编号：MK1020）、bcl—2羊抗鼠IgG多抗（编号：BA0412，2005—03）、bax羊抗鼠IgG多抗（BA0315，2005—03）、二氨基联苯胺（ED1022，2005—03）、即用型SABC免疫组化染色试剂盒（SA1022，2005—03）、以及各阳性对照片购自武汉博士德生物工程有限公司。 论文代写。
1.3.1 分组与造模30只昆明种小鼠随机分为3组，即常温常湿组、温燥组与凉燥组，每组10只，置人工气候箱内、用昆明种小鼠饲料常规饲养，按表1模拟外燥“温度－相对湿度－风”综合条件刺激进行造模。
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1.3.2 气管细胞凋亡检测用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）［3］。各组小鼠在实验前4 h禁食、禁水。主要步骤：第14天断颈处死小鼠，从喉头至气管分叉处剪取气管，标本经100 g/L中性甲醛固定，常规脱水包埋，4 μm厚连续切片；3%H2O2甲醇37℃阻断10 min，0.1 mol/L pH 6.0柠檬酸缓冲液微波加热至95℃，加核苷酸/核苷酸转移酶混合液37℃，1 h，转换POD 37℃，30 min，DAB显色，苏木素复染。结果判断：光镜观察气管上皮细胞核内之棕黄色颗粒为TUNEL染色阳性。高倍镜下随机计数200个细胞， 计算 ：细胞凋亡率(%) = 凋亡细胞数/200×100% 论文代写。