高效液相色谱法测定止痢宁片中苦参碱的含量
【摘要】 目的建立高效液相色谱（HPLC）法测定止痢宁片中苦参碱的含量。方法采用C18柱（150mm×4.6 mm， 5 μm），以乙腈－水（1 000 ml水加2 ml三乙胺，用磷酸调pH值至3.0）（4∶96）为流动相，流速为1.0 ml/min，柱温为40℃，检测波长为220 nm。结果在建立的色谱条件下，苦参碱与杂质能完全分离，苦参碱线性范围为18.712～299.392 μg/ml （r＝0.999 9），平均回收率为101.60％，RSD为 0.8％。结论此法简便准确，专属性好，可用于止痢宁片中苦参碱的含量测定。
止痢宁片是由穿心莲、苦参、木香组成的半浸膏片，具有清热祛湿、行气止痛等功效［1］，穿心莲和苦参均为其中的主药。本品已收载于卫生部《药品标准中药成方制剂》第四册，其质量标准中未有含量测定项。国内已有关于该药中脱水穿心莲内酯含量测定的研究报道，而未见关于苦参碱含量测定的报道，为更好地控制止痢宁片的质量，本课题组研究建立了HPLC法测定制剂中苦参碱的含量的方法，该方法简便、准确、专属性好，能有效地控制制剂的内在质量。
1 仪器与材料。
高效液相色谱仪：Agilent 1200（带有Agilent化学工作站）；十万分之一电子天平（Sartorius cp225D ）。苦参碱对照品（批号：110805—200306，供含量测定用），由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂为分析纯。
止痢宁片分别为A：陕西白云制药有限公司（批号：070501）；B：修正药业集团股份有限公司（批号：070603）；C：四川禾邦阳光制药有限责任公司（批号：070801）；D：吉林省跨海生化药业制造公司（批号：20070402）。
2 方法与结果。
2.1 色谱条件与系统适用性 色谱柱：奥泰ODS C18（150mm×4.6 mm， 5 μm）；流动相：乙腈－水（1 000 ml水加2ml三乙胺，用磷酸调pH值至3.0）（4：96）；流速：1.0 ml/min；检测波长220 nm；柱温40℃；进样量10 μl。苦参碱的保留时间为5.0min，与邻峰分离度大于1.5，理论板数不低于2 500。阴性对照无干扰。色谱图见图1。
2.2 溶液的配制。
2.2.1 对照品溶液 称取苦参碱对照品约23 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液 取本品10片，精密称定，研细，取约1片量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，浓氨1.0 ml，密塞，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
a对照品溶液； b供试品溶液； c阴性对照溶液； 1.苦参碱。
图1 苦参碱的HPLC图。
2.2.3 阴性对照液 按止痢宁片处方，制成缺苦参的阴性样品，照“2.2.2”项制备方法制得阴性对照液。
2.3 线性关系考察 精密吸取苦参碱对照品储备液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，16.0 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别取稀释液，进样10μl，以苦参碱浓度（单位：μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得苦参碱的回归方程为：A=3.556 9C—10.812，r=0.999 9。苦参碱在18.712 ～299.392 μg/ml范围内线性关系良好。