虎杖疏松愈伤组织诱导条件的研究
作者：曾超珍 刘志祥 黎继烈 吴耀辉。
【摘要】 目的研究虎杖疏松愈伤组织诱导的最佳激素条件。方法通过单因素和正交实验研究不同外植体、不同浓度的激素组合对虎杖愈伤组织诱导率、疏松程度以及增殖率的影响。结果以诱导率为指标，ＮＡＡ 对虎杖细胞脱分化影响最显著。以增殖率为指标，２，４ －Ｄ 对虎杖的细胞生长分裂影响最显著。结论以叶柄为外植体更容易诱导出疏松的愈伤组织，虎杖愈伤组织诱导和继代增殖最佳的激素组合分别为６ －ＢＡ １．５ ｍｇ／Ｌ ＋２，４ －Ｄ １．０ ｍｇ／Ｌ ＋ＫＴ ０．２ ｍｇ／Ｌ ＋ＮＡＡ０．５ ｍｇ／Ｌ 和６ －ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ ＋２，４ －Ｄ ２．０ ｍｇ／Ｌ ＋ＫＴ ０．４ ｍｇ／Ｌ ＋ＮＡＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ。
Abstract：ObjectiveTo sｔｕｄｙ the ｏｐｔｉｍｕｍ ｈｏｒｍｏｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｌｏｏｓｅ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Polygonum cuspidatum．MethodsＢｙ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｌａｎｔｓ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ， ｌｏｏｓｅｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Polygonum cuspidatum were ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．ResultsＮＡＡ had ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ２，４ －Ｄ ｈａd ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｃｅｌｌ ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Polygonum cuspidatum．ConclusionLeafstalk is ｍｕｃｈ ｅａｓｉｅｒ ｔｏ ｌｏｏｓｅ ｃａｌｌｕｓ ｉｎ ｄｕｃｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ ａｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ６ －ＢＡ １．５ ｍｇ／Ｌ ＋２，４ －Ｄ １．０ｍｇ／Ｌ ＋ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ ＋ＮＡＡ０．５ ｍｇ／Ｌ ａｎｄ ６ －ＢＡ２．０ ｍｇ／Ｌ ＋２，４ －Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ ＋ＫＴ０．４ｍｇ／Ｌ ＋ＮＡＡ０．４ ｍｇ／Ｌ．。
Key words：Polygonum cuspidatum； Ｌｏｏｓｅ ｃａｌｌｕｓ； Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ； Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ 虎杖Polygonum cuspidatum 是蓼科蓼属多年生灌木状的草本植物［１］ ，具有散风利湿、止咳去痰、清热解毒、活血化淤的功效，其成分主要为蒽醌类、黄酮类、芪类化合物和酚性成分等，具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、降血脂、抗菌和治疗心血管疾病的作用［２ ～５］ 。 近年来，虎杖中的芪类化合物——白藜芦醇是研究热点，随着白藜芦醇的需求量越来越大，由于过度的开发，使得虎杖野生资源面临枯竭。因此利用虎杖组织和细胞培养大规模生产白藜芦醇，是一个重要的解决途径。目前，对虎杖的组织培养已有一些研究［６，７］，但对虎杖的疏松愈伤组织的诱导和增殖还未见报道。本研究优化虎杖愈伤组织的诱导条件，以诱导出生长旺盛、质地疏松的愈伤组织，为虎杖细胞悬浮培养提供试验基础。
１ 材料与方法。
１．２ 方法。
１．２．１ 外植体消毒选取幼嫩虎杖的叶柄作为外植体，用流水冲洗干净６ ～１０ ｍｉｎ，７５％酒精浸泡３０ ｓ，无菌水洗涤３ 次，再用０．１％升汞溶液消毒１０ ｍｉｎ，无菌水冲洗３ 次，把叶柄切成０．５ ｃｍ大小，接种于含不同植物生长调节物质的ＭＳ 固体培养基上进行培养。培养条件：温度（２５ ±２）℃，光照强度１ ２００ ｌｘ，光照１２ ｈ／ｄ，每２５ 天继代１ 次。