敦煌古方“紫苏煎”对慢性支气管炎大鼠血清、肺组织中NO、ET
作者：王凤仪,贾育新,李生财,王小荣,刘峰林,楚惠媛。
摘 要：目的：探讨敦煌古方“紫苏煎”治疗慢性支气管炎的作用机制。方法：采用改良烟熏法复制慢性支气管炎大鼠模型，实验动物随机分为模型组、冲剂组、紫苏煎低剂量组、紫苏煎高剂量组及不加处理的空白对照组。造模各组以高、低剂量紫苏煎、止咳化痰冲剂和生理盐水进行干预，测定各组大鼠血清、肺组织中内皮素—1（ET1）及一氧化氮（NO）的含量。结果：模型组大鼠血清、肺组织中ET1较正常空白组明显升高（Ｐ＜0.01）；NO含量较正常空白组明显降低(Ｐ＜0.01)。与模型组比较，紫苏煎高剂量组、紫苏煎低剂量组及冲剂组血清、肺组织中ET1明显降低（Ｐ＜0.05或Ｐ＜0.01）；NO含量均明显升高（Ｐ＜0.05或Ｐ＜0.01）。与冲剂组比较，紫苏煎高剂量组血清、肺组织中ET1含量明显低于冲剂组（Ｐ＜0.05或Ｐ＜0.01）；NO含量均高于冲剂组（Ｐ＜0.05或Ｐ＜0.01）。结论：“紫苏煎”可显著提高慢性支气管炎模型大鼠的NO含量，降低ET1的含量。提示该方可以调节和保持血管、气管舒缩平衡，减轻炎症反应。
关键词：敦煌医学；紫苏煎；慢性支气管炎；ET1；NO；实验研究。
敦煌古方“紫苏煎”治疗慢性支气管炎疗效肯定，但其作用机制尚不十分清楚。有研究结果表明，体内氧化―抗氧化平衡失调[1]及血管系统的舒张―收缩性失衡[2]在慢性支气管炎的形成和发展中具有重要作用。 本实验通过观察“紫苏煎”对慢性支气管炎大鼠血清、肺组织中内皮素—1（ET1）及一氧化氮（NO）含量的影响，进一步探讨其治疗慢性支气管炎的作用机制。
1材料。
1.1动物。
健康Wistar老龄大鼠52只（清洁级），质量200±20 g，雌雄各半，由甘肃中医学院实验动物中心提供，动物合格证号：医动字第235号。
1.2试剂盒。
ET1试剂盒（批号：200508）、NO试剂盒（批号：20050816）均由南京建成生物工程研究所提供。
1.3药物。
“紫苏煎”药剂：原方各种药材按照比例配方共计相当生药146 g，将4剂中药打成粉末，在适宜温度下渗滤、醇提，挥发酒精，平均分为4等份，其中1份浓缩成生药浓度为1 g/mL的紫苏煎液，另外3份合并浓缩成生药浓度为2.5 g/mL的紫苏煎液，分别作为低、高剂量组实验用药剂。祛痰止咳冲剂，由广州市花城制药厂出品（批号：20041013），实验时用蒸馏水配制成浓度为0.085 g/mL的混悬液使用。
2方法。
2.1动物分组。
采用数字表法将52只大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、紫苏煎低剂量组及紫苏煎高剂量组，共5组。其中模型组12只，其余各组10只。
2.2动物造模。
除空白对照组外，其余各组用烟熏法造模。造模参照文献[3]法，采用改良烟熏法复制：（1）将造模组大鼠共42只置于90 cm×60 cm×60 cm的烟室中，烟室上方开一0.4 cm×60 cm的缝隙，下面外接回活塞通气管具，通气管具活塞端接烟条，后端接50 mL注射器。（2）将锯末、旱烟条各12 g混合均匀，卷成每支8 g左右的烟条。将烟条接在活塞端，点燃烟条，抽动活塞即可顺利通入。（3）烟熏大鼠：共30 d，其中前20 d每日2次，每次30 min，每次用烟条3支，每隔10 min加入1支;后10 d每天1次，每次30 min，每次用烟条3支，每隔10 min加入1支。（4）第20 d时，取模型对照组大鼠雌雄各1只，断颈处死，取右肺中部组织在10 %福尔马林中固定，再经过脱水、浸蜡、包埋等处理，切片，常规HE染色做成病理切片光镜下观察，证明慢性支气管炎已经形成，造模成功。（5）从造模第20 d起，空白对照组不施加任何影响，模型对照组用生理盐水灌胃，阳性对照组用公开上市中成药止咳化痰冲剂灌胃，紫苏煎高剂量组、紫苏煎低剂量组用配制的高剂量、低剂量紫苏煎液灌胃。（6）用药剂量见表1、表2，冲剂组相当于临床药量的10倍，紫苏煎低剂量组相当于临床药量的5倍，紫苏煎高剂量组相当于临床药量的15倍，各组均用药20 d。
2.3检测方法。
血清制备：在治疗结束后第2 d，将大鼠股动脉剪断取血8 mL左右，分为2份，每份4 mL，其中1份立即加入抗凝剂并与抗凝剂混合均匀，静置，以3500 r/min离心，移取上层血清，在—20 ℃下冻存待测。另一份立即以3500 r/min离心，移取上层血清，在—20 ℃下冻存待测。肺组织匀浆的制备：（1）大鼠取血后，立即断颈处死，剖取气管和肺脏，取左肺下叶组织0.3 g左右，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，置于小烧杯中。（2）用移液管量取0.86 %的预冷生理盐水2.7 mL（按照实际组织重量的9倍计算），先将2/3置于小烧杯中，用眼科剪尽快剪碎组织块。（3）将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，用剩余的1/3冷盐水冲洗小烧杯，一起倒入匀浆管中。（4）将匀浆器下端插入盛有冰水混合物的器皿中，充分研磨使组织匀浆化。（5）将制备好的匀浆以3000 r/min离心15 min，移取上清液，在—20 ℃下冻存待测。检测方法：NO采用硝酸还原化学比色法测定，ET1采用放射免疫法测定。严格按试剂盒说明检测。为了避免实验干扰因素，肺组织匀浆中所测物质含量以实测值与总蛋白比值表示。