细胞凋亡和Caspase
作者：谢庆祥，林吓聪，韩聪祥。
Significance of apoptosis and Caspase3 expression in chronic obstructive kidneys。
ABSTRACT: Objective To investigate the roles and mechanisms of apoptosis and its effector molecule Caspase3 in the pathogenesis of chronic obstructive kidney. Methods Caspase3 expressions in 43 obstructive renal tissues and 10 normal renal tissues were examined by immunohistochemistry, and apoptosis was examined by TUNEL methods. The relationships between Caspase3 expression of obstructive renal tissues and degree of hydronephrosis and renal fibrosis were evaluated. Results Both Caspase3 expressions and apoptosis indexes in tubular and interstitial cells of obstructive kidneys were significantly higher than those in normal kidneys (P0.05). Caspase3 expressions in obstructive kidneys were in close association with apoptosis and hydronephrosis (P0.05). Caspase3 expressions in interstitial cells of obstructive kidneys were closely related to the degree of renal fibrosis (P0.05). Conclusion Increased Caspase3 activity plays an important role in renal cell apoptosis associated with urinary obstruction.
KEY WORDS: kidney tissue; hydronephrosis; apoptosis; Caspase。
摘要：目的 探讨细胞凋亡及其效应分子Caspase3在梗阻性肾病中的作用及其机制。方法 应用免疫组化方法和原位细胞凋亡检测法分别检测43例梗阻肾组织和10例正常肾组织中Caspase3表达和细胞凋亡指数，并分析梗阻肾Caspase3表达与肾积水程度及肾纤维化程度之间关系。结果 梗阻肾的肾小管和间质中细胞凋亡指数和Caspase3表达均显著高于正常肾组织(P0.05)，而且Caspase3表达与细胞凋亡指数密切正相关(P0.01)，与肾积水程度也密切正相关(P0.05)；梗阻肾间质Caspase3表达与肾纤维化程度密切相关(P0.05)。结论 Caspase3活性增强导致细胞凋亡增多在梗阻肾病理生理过程中起着重要作用。
关键词：肾组织；肾积水；细胞凋亡；Caspase 由各种原因引起的尿路梗阻而导致的肾积水是泌尿外科常见病，但对于其肾萎缩、肾纤维化分子病理过程了解甚少。本研究通过检测梗阻性肾组织中细胞凋亡及其主要效应分子Caspase3的表达，探讨两者在梗阻性肾病的病理生理过程中的作用。
1 材料与方法。
1.1 临床资料 收集本院1991年1月至2002年12月因梗阻性肾积水行患肾切除43例患者，年龄6—73岁，平均37岁；男27例，女16例。梗阻原因：肾盂输尿管交界处狭窄11例，输尿管末段狭窄3例，输尿管全程炎性狭窄1例，肾结石13例，输尿管上段结石9例，中段2例，下段1例，肾盂癌3例。静脉肾盂造影检查41例：不显影(2h以内)36例，延迟显影5例。根据肾皮质厚度(大部分)将肾积水程度分为两级：皮质厚度≤3mm 29例，3—7mm 14例。肾盂尿检查30例：pH值7.0—8.1，尿比重均≤1.01。取患肾明显薄软处组织和10例正常肾组织进行石蜡包埋，切片。常规HE染色，病理组织学检查。
1.2 方法 ①免疫组化：采用SABC方法(微波炉热修复)。Caspase3(1∶40)为兔抗人多克隆抗体，SABC试剂盒为武汉博士德生物公司提供。DAB显色，苏木素复染。PBS替代一抗作为阴性对照。②细胞凋亡检测：采用原位细胞凋亡TUNEL检测法，按说明书进行操作(德国宝灵曼公司提供)。③肾组织中胶原纤维染色：采用Van Gieson苦味酸酸性复红染色法行胶原纤维染色，显微镜下观察，胶原纤维呈红色，肌纤维等组织呈黄色。
1.3 结果判断 Caspase3阳性染色主要分布于细胞浆中，少数也见于细胞核，呈棕黄色或棕褐色。按阳性细胞数分为三个等级，阳性细胞数0为阴性(—)、≤25%为弱阳性(+)、＞25%为强阳性()。凋亡指数：至少计数500个细胞中凋亡阳性细胞百分比。根据胶原纤维含量判断肾纤维化程度：0级(正常)为肾小球囊周和肾小管基底膜无胶原纤维染色，一级为肾小球和肾小管，周围可见胶原纤维染色，二级为肾小球和肾小管，周围胶原纤维染色明显增强、肾小管基底膜增厚，三级为肾间质，可见明显的胶原纤维染色。
1.4 统计方法 应用SPSS 10.0统计软件包，采用χ2检验、方差分析和两样本比较t检验。