血管生成素2在食管鳞癌中的表达及意义

作者：姜晓燕 彭贵勇 阎晓初 孙永刚。

【关键词】 血管生成素2 食管肿瘤 血管形成 免疫组织化学。

【Abstract】 Objective To investigate the expression of angiopoietin2 (Ang2) in human squamous carcinoma of esophagus　and determine it‘s relationship with pathological grades, infiltration and metastasis factors. Methods SP immunochemical method was performed to detect the expression of Ang2 in esophagus tissues from 54 cases with squamous carcinoma of esophagus and 22 normal persons. The pathological grades, infiltration and metastasis factors were statistically analyzed. Results Of 54 cases with squamous carcinoma of esophagus, 37 cases had positive expression of Ang2, with positive rate of 67.06%, which was significantly higher than that in normal esophagus (P0.05). The expression rate of Ang2 increased significantly with the increase of pathological grading and lymphatic metastasis (P0.05). Conclusions The expression of Ang2 may be positively related to clinical stages and pathological grades in squamous carcinoma of esophagus, indicating that Ang2 may be involved in the neovascularization of carcinoma and in the occurrence and progression of squamous carcinoma of esophagus and hence can be a useful biological predictor of progression in esophageal carcinoma.

【Key words】 Angiopoietin2; Squamous carcinoma of esophagus; Angiogenesis; Immunohistochemistry。

血管生成素2(Angiopoietin2，Ang2)作为血管生成素家族(Angiopoietins,Angs)重要成员之一，在肿瘤血管生成中发挥调节作用。我们采用免疫组织化学方法对食管鳞癌组织标本中的Ang2进行检测,旨在探讨其与食管鳞癌病理分级及浸润、转移之间的关系。

1 资料和方法。

1.1 临床资料。

收集我院2005年10月至2006年3月行电子胃镜检查发现的原发性食管鳞状细胞癌患者85例，其中男63例，女22例；年龄41～76岁，平均59.0岁。病理分级采用常用3级分级法［1］，其中Ⅰ级50例、 Ⅱ级27例、Ⅲ级8例。另选22例正常食管组织标本作对照。所有标本经10%甲醛溶液固定后常规石蜡包埋，制备成5 μm厚的连续切片，用于免疫组织化学染色，并做常规苏木精伊红染色，病理证实诊断。患者病理组织活检及术前均未接受任何放疗或化疗。

1.2 主要试剂和方法。

羊抗人Ang2(N18)多克隆抗体为Santa Cruz公司产品，工作浓度1∶100。SP免疫染色试剂盒购自北京中山生物公司。实验方法：经10%甲醛固定标本，石蜡包埋后切片，一抗为1∶100 Ang2多克隆抗体，二抗为生物素标记兔抗山羊IgG，三抗为ABC复合物，DAB液显色，苏木精复染，以PBS缓冲液代替一抗作空白对照，用已知的大肠癌阳性片作为阳性对照。

1.3 结果判断标准。

采用Ang2阳性染色强度结合阳性细胞所占百分比作为判断标准。在400倍显微镜视野下每张切片随机观察4个视野，将切片中平均阳性细胞比例及染色深浅分别记0～3分。切片中无阳性细胞为0分，阳性细胞＜25%为1分，阳性细胞25%～50%为2分，阳性细胞＞50%为3分；染色深度以多数细胞为准，无阳性细胞为0分，淡黄色显色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。再按这两项指标的积分相加将结果分为4级：0分为“—”；1～2分为“+”；3～4分为“”；5～6分为“”。其中“”、“”为强阳性表达。

1.4 统计学处理。

用SPSS 10.0统计软件行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果。

2.1 Ang2在食管鳞癌组织及正常食管组织中阳性染色结果及分布。

在食管癌组织中， Ang2的阳性表达率为67.06%，阳性染色细胞呈棕黄色颗粒状或线网状染色，分布于胞质及胞膜，部分微小血管也可见Ang2着色(图1)。在正常食管黏膜组织中Ang2多为阴性表达，少数为弱阳性表达(表1)。结果示Ang2的表达在食管癌组织及正常组织之间比较，两者间差异有统计学意义(P0.05)。提示食管癌组织中Ang2呈高表达。表1 食管鳞癌组织及正常食管组织中Ang2表达组织类型。

2.2 Ang2的表达与食管鳞癌病理分级及浸润、转移的关系。

Ang2表达有明显的异质性，强阳性表达的癌细胞常位于浸润前缘或癌组织的边缘，也有少量成纤维细胞和血管内皮细胞等间质细胞表达阳性；正常对照组只有少数呈弱阳性表达。Ang2在不同病理分级中表达阳性率比较，差异有统计学意义(P0.05)，且Ang2表达的阳性率与浸润深度及淋巴结转移相比较，差异均有统计学意义(P0.05)。提示Ang2阳性表达率随食管癌病理分级上升而升高(表2)。表2 食管鳞癌中Ang2的表达与肿瘤病理分级及其浸润、转移的关系。