龙牡洗剂抗真菌活性试验
【摘要】 目的 手足癣是皮肤真菌病中发病率最高的病种, 在人群中的发病率约为15%,我院临床应用龙牡洗剂治疗手足癣,本文探讨了龙牡洗剂的体外抗菌作用。方法 以临床皮肤科常见致病菌为受试菌,采用药敏片法、比浊法、平板培养基连续稀释法对洗剂的抗真菌活性[1、2]进行了研究。结果 龙牡洗剂的抑菌圈直径达19.4 mm为高敏,比浊法、平板培养基连续稀释法显示强力抗菌活性。结论 龙牡洗剂对真菌有一定的抑菌和杀菌作用。 毕业论文网 【关键词】 龙牡洗剂;抗真菌实验 作者单位:734000张掖市人民医院 龙牡洗剂主要成分为:龙胆草15 g、牡丹皮15 g、白藓皮15 g、蛇床子15 g,苍耳子15 g,苦参15 g,黄柏15 g、当归15 g、薏苡仁15 g、薄荷15 g、地黄15 g。具有清热燥湿、抗菌消炎、止痛止痒功效,每次用洗剂洗、泡20 min以上,应用于各种手足癣。本处方的制剂在临床上使用多年,实验论证该制剂的抑菌能力、杀菌作用强弱,从而为中药制剂在临床上的合理应用提供依据。 1 材料及方法 1.1病原菌检测 1.1.1 配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基 取马铃薯块200~300 g,琼脂 20 g,葡萄糖20 g,水 1000 ml。按规程配制,然后分装,灭菌,备用。 1.1.2 刮取患者皮损边缘的鳞屑或水疱壁,进行真菌培养,依形态学特征区分菌属。 1.1.3 培养方法 使用点植法,一点在斜面中央,一点在上1/4处,一点在下1/4处。培养条件:pH5.0~7.0,温度25℃~28℃,分离鉴定真菌,皮肤癣菌在培养基上产生不同色素。 2 药敏试验 2.1 药敏片法 2.1.1 药敏片的制备 取新华1号定性滤纸,用打孔机打成6 mm直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中,瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15~20 min高压消毒后,放在37℃温箱或烘箱中数天,使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作 洗剂制备成1 g:1 ml规格备用,在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入1 g/ml药液0.25 ml,并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液,翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称,放37℃温箱内过夜,干燥后即密盖,置阴暗干燥处存放,有效期3~6个月。 2.1.3 在超净台中,用经酒精灯灭菌的接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。取药敏片贴到平皿培养基表面[3],每个批号的药物抑菌实验重复3 次, 抑菌结果为3 次实验平均值。 2.1.4 质控 标准菌株的抑菌圈直径应落在预期范围内,如果超出该范围,应视为失控而予以纠正。抑菌作用大小主要取决于所用提取物的浓度。 表1 药敏片法实验结果 批号抑菌圈(mm) 123 平均 070321 20 21 20 20 07032518 19 18 19 07032918 19 19 19 07033120 19 21 21 07040518 19 18 18 07040917 18 19 18 07051219 20 2020 07052720 19 2020 07060321 20 2020 注:抑菌圈直径平均为:19.4 mm 2.2 比浊法[4] 制备MH(水解酪蛋白)肉汤培养基, 分装于试管中, 每支5 ml, 常压灭菌后加入不同浓度的洗剂,MH 肉汤培养基含药浓度分别为5、2.5、1.25、0.625 g/100 m l。然后接种制备好的实验菌液0. 05 m l (105 CFU/ml) , 并以无药MH 肉汤培养基接种相同菌种作为对照。于25℃~28℃恒温箱培养72 h 后, 在721 型分光光度计480 nm 测定各处理液的吸光度, 计算细菌的相对生长率。 2.3 平板培养基连续稀释法[4] 洗剂用无菌蒸馏水作一系列倍比稀释后, 分别将不同浓度药液2 ml 加入到18 m l灭菌MH 琼脂培养基中制成平板培养基, 冷凝后MH 平板培养基含药浓度分别为5、2.5、1.25、0.625 g/100 ml。取0.1 ml(105CFU/ml)实验菌液滴加到MH琼脂培养基表面,用灭菌的L型玻璃棒涂匀。每种浓度药物每个菌种接种3皿,结果为3次实验平均值,并以无药MH琼脂培养基接种相同菌种作为对照。置25℃~28℃恒温培养72 h后, 计数各皿菌落数, 计算细菌相对生长率。 表2 龙牡洗剂对真菌相对生长率的影响 药物浓度?g/100 ml 毛癣菌属 小孢子菌属表皮癣菌属青霉属 交链孢属 固体液体固体液体固体液体固体液体固体液体 空白无药对照100100100100100100100100100100 0.62542404431432541243119 1.2532213023331729202811 2.585123756361 50000000000 3 讨论 3.1 实验采用纸片琼脂扩散法、比浊法和稀释法同时进行抗菌实验研究。抑菌圈直径>20 mm为极度敏感;抑菌圈直径在15~20 mm为高敏;抑菌圈直径在10~15 mm为中敏;抑菌圈直径。
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