B 细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22抗原表达检测及临床意义
作者：张东生 丁娅 李苏 黄慧强 夏忠军 李志铭 林旭滨 姜文。
【摘要】 【目的】 检测CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中的表达，初步探讨CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织的表达和临床病理特征的关系。【方法】 采用免疫组化方法检测B细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22抗原的表达，分析肿瘤组织CD22抗原表达和临床病理特征等的关系。【结果】 CD22抗原在B细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织阳性表达主要见于细胞浆和细胞膜。全组21例，阳性率100.00%(21/21)，强阳性(+++)率14.29%(3/21)，中等阳性(++)率33.33%(7/21)，弱阳性率(+)52.38%(11/21)。CD22表达与病理亚型、性别、年龄以及其它临床病理特征等无明显相关性。【结论】 CD22抗原在B细胞非霍奇金淋巴瘤中广泛表达，可以采用免疫组化的方法检测出，该方法简单易行，有一定临床应用前景;B细胞非霍奇金淋巴瘤组织CD22表达和临床病理特征的关系需进一步研究。
Abstract： 【Objective】 To examine the CD22 antigen expression in B cell non—Hodgkin‘s lymphoma (NHL) tissues and investigate its relationship with clinicopathological characteristics. 【Methods】 CD22 antigen expression in B cell NHL tissues was detected with immunohistochemistry staining. The correlation between CD22 expression and clinicopathological characteristics was analyzed. 【Results】 CD22 antigen was detected in B cell NHL tissue section by immunohistochemistry staining. The positive staining particles were located in cytoplasma and/or membrane. CD22 expression was showed in the total 21 cases (positive rate 100.00%). Strong expression in 3 cases (14.29%)， moderate expression in 7 cases (33.33%)， and weak expression was detected in 11 cases (52.38%). CD22 expression in B cell NHL tissue was not correlated with pathologic subtypes， gender， age， or other clinicopathological characteristics. 【Conclusion】 CD22 antigen is generally expressed in B cell NHL and easily detected by immunohistochemistry staining， and the detection method can be used in clinical practice. CD22 expression in B cell NHL tissue and its relationship with clinicopathological characteristics needs further study.
抗原分子是一个相对分子质量为135 k的跨膜蛋白，为B淋巴细胞限制性抗原。在B细胞和前B细胞，CD22抗原仅存在于胞浆中，分化至成熟B细胞时，该抗原表达在细胞膜上，激活时表达量增加。B细胞分化至终末阶段浆细胞时，CD22抗原消失。CD22为粘附分子，可以放大B细胞激活信号。CD22广泛表达于正常B细胞和B细胞淋巴瘤细胞[1—2]。CD22作为B细胞非霍奇金淋巴瘤治疗的新靶点，是目前研究的热点和焦点，已取得较大的进展[1—7]。目前国内外均有针对CD22靶点的新药在进行临床试验，国外的Ⅰ/Ⅱ期研究结果以及国内本课题组完成的Ⅰ期临床研究结果，均令人较为鼓舞，有进一步研究的前景[1—6]。因此，找到简单、临床使用方便的检测CD22抗原的方法，不仅具有理论意义，更具有实际的临床应用前景。目前检测CD22表达抗原表达常用流式细胞仪检测的方法[8—9]，但流式细胞仪只能检测新鲜肿瘤组织或细胞株中CD22抗原表达，临床应用较为不便。我们在国内首次采用免疫组化的方法检测21例非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22抗原表达，效果确实，方法简便可行，并初步探讨CD22表达水平和临床病例特征的关系。
1 材料和方法。
1.1 实验标本。
21例B细胞非霍奇金淋巴瘤患者肿瘤组织石蜡块中，12例取自中山大学肿瘤防治中心病理科，均为存档石蜡组织块，9例取自外院病理科，由患者借出。将组织蜡块切成4 μm厚的切片粘在涂胶玻片上备用。
1.2 患者资料。
患者为自2007年4月至2008年11月来中山大学肿瘤医院就诊，共21例B细胞非霍奇金淋巴瘤患者。21例患者中，男10例，女11例，年龄范围24 ～ 67岁，中位年龄52岁，体力情况0 ～ 2级。21例患者的病理亚型，滤泡性淋巴瘤8例，滤泡转弥漫2例，弥漫大B细胞淋巴瘤8例，小淋巴细胞淋巴瘤/慢性淋巴细胞白细胞(SLL/CLL)2例，伯基特淋巴瘤1例;19例为复治患者，2例为初治患者，均为滤泡性淋巴瘤;复治患者既往使用过CD20单抗治疗，或一种或多种方案化疗，部分患者接受过放射治疗。8例患者既往使用过美罗华或国产CD20单抗，1例移植后复发，1例既往使用过Zevalin。
1.3 实验主要试剂和步骤。
抗CD22抗体购自武汉博士德生物工程有限公司(进口分装)，为1只0.2 mL 兔抗人IgG多抗。S—P超广谱免疫组化试剂盒(含阻断血清、二抗与三抗)及DAB购自迈新公司。免疫组化步骤按照迈新公司推荐的S—P法免疫组化实验步骤进行。切片放入二甲苯梯度稀释液中脱蜡，无水乙醇梯度至水，新鲜配置3%过氧化氢，室温10 min灭活内源性过氧化物酶，PBS微波修复抗原，滴加血清封闭以减少非特异性染色，滴加1：100稀释的CD22兔抗人多抗，4 ℃反应过夜，滴加生物素化二抗IgG 37 ℃反应30 min，DAB显色，苏木素轻度复染30 s左右，盐酸分化，二甲苯透明，用中性树胶封片。
1.4 免疫组化结果判断。
对照HE切片，确定肿瘤细胞区域。以肿瘤细胞胞浆或胞膜见到棕黄色或棕褐色颗粒染色为阳性细胞，连续数10个高倍镜视野中的肿瘤细胞数，10个视野中阳性肿瘤细胞数之和除以10个视野中肿瘤细胞数之和即为肿瘤细胞染色的百分比，根据肿瘤细胞染色的百分比划分为不同的等级：(—)或阴性为阳性细胞0;(+)或弱阳性为阳性细胞比例≤25%;(++)或中等阳性为阳性细胞比例达 25% ～ 50%;(+++)或强阳性为阳性细胞比例≥50%。(—)和(+)为低表达，(++)和(+++)为高表达。
1.6 统计学方法。
采用SPSS 16.0统计软件进行统计分析，频数资料采用Fisher精确概率法以及非参数的Kruskal—Wallis H检验，以P 0.05定义为有统计学意义。
2 结 果。
CD22抗原可以采用免疫组化方法在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中检测出，阳性表达的棕黄色或棕褐色颗粒主要见于细胞浆和细胞膜。全组21例，阴性0例，弱阳性(+)11例，中等阳性(++) 7例，强阳性(+++)3例，高表达10例，低表达11例，阳性率100.00%(21/21)，中等阳性率33.33%(7/21)，强阳性率14.29%(3/21)。CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中的弱阳性、中等阳性、强阳性以及阴性表达分别见图1A ～ D。
2.2 CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中的表达和临床病理特征的关系。
全组8例弥漫大B细胞淋巴瘤患者，肿瘤组织中CD22抗原呈弱阳性表达2例，中等阳性表达4例，强阳性表达2例;8例滤泡性淋巴瘤患者，弱阳性表达7例，中等阳性表达1例;2例滤泡转弥漫的非霍奇金淋巴瘤患者，1例为中等阳性的表达，1例为强阳性表达，2例慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤患者，肿瘤组织CD22表达均为弱阳性。1例伯基特淋巴瘤患者，肿瘤组织CD22抗原呈中等阳性表达。非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22表达与病理亚型、性别、年龄以及其它临床病理特征无明显相关性(表1)。