分光光度法测定不同产地灰毡毛忍冬中咖啡酰奎宁酸的含量
【摘要】 目的以咖啡酰奎宁酸的含量为指标，测定评价国内各主产区灰毡毛忍冬干燥花蕾的质量。方法以绿原酸做对照，用分光光度法测定。结果测定了国内主产区四省市灰毡毛忍冬干燥花蕾中咖啡酰奎宁酸的含量，结果显示咖啡酰奎宁酸含量为10.06%～12.24%,远比正品金银花中的高。结论 为灰毡毛忍冬干燥花蕾的开发和利用提供参考。
Abstract：ObjectiveTo determine the content of caffeoylquinic acid in Lonicera macranthoides dry buds in each main yield area for evaluating the quality of them. MethodsTo make the comparison with chlorogenic acid and the spectrophotometry analysis was used. ResultsThe contents of caffeoylquinic acid in Lonicera macranthoides dry buds in 3 provinces and 1 city were determined by spectrophotometry. It showed that the contents of caffeoylquinic acid were 10.06%～12.24% and were far more higher than that in Lonicera japonica. ConclusionThe reports may provide a useful reference for their development and utility of Lonicera macranthoides.
Key words：Lonicera macranthoides； Caffeoylquinic acid; Spectrophotometry 灰毡毛忍冬Lonicera macranthoidesH.—M.一直是湖南、重庆、四川、贵州等地的习用金银花品种［1］，但自2005年版《中国药典》将其收入新增加的“山银花”项下以来［2］，不时有将其称为非法金银花的宣传［3］。金银花中的有效成分主要是咖啡酰奎宁酸类，包括绿原酸、异绿原酸、新绿原酸等，其它成分相对含量很低［4～7］。以上咖啡酰奎宁酸类成分中紫外光谱基本是由其结构中共有的咖啡酰基产生的，故其紫外光谱特征几乎一致［8］。为了客观评价灰毡毛忍冬的质量，本文以绿原酸做对照，以道地金银花河南“密银花”L. japonica Thunb.做比较，用分光光度法对我国主产区的灰毡毛忍冬中的咖啡酰奎宁酸类总含量进行了测定。
1 材料 Lambda35分光光度计（Perkin Elmer），TCQ—250超声波清洗器（北京医疗设备二厂），Sartrorius BP211D 1/10万电子分析天平，ZK—82B型电热真空干燥箱。绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，80℃减压干燥至恒重），蒸馏水，分析纯甲醇。 实验材料经成都中医药大学万德光教授鉴定为灰毡毛忍冬的成熟干燥花蕾，“密银花”委托河南中医学院曹继华教授采集鉴定。
2 方法与结果。
2.1 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品8.08 mg，置于100 ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，配制成80.8 μg·ml—1的绿原酸溶液。
2.2 测定波长的选择将对照品溶液和供试品溶液在200～400 nm进行扫描，其均在327 nm波长处有最大吸收，故检测波长选择为327 nm。
2.3 标准曲线的绘制及线性范围精密吸取绿原酸对照品1，4，8，12，15，20 ml分别置于50 ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，配制成1.616，6.464，12.928，19.392,24.240,32.320 μg·ml—1的绿原酸溶液，以甲醇作空白对照，在327 nm处测吸收度。以吸收度（A）对进样浓度（M）进行回归，得绿原酸线性回归方程为A=0.041 13M—0.006 8，r=1.000 0，线性范围为1.616～32.320 μg·ml—1。
2.4 供试品溶液的制备精密称取药材细粉约1.0 g，加甲醇定容于50 ml容量瓶中，超声30 min,放置至室温，滴加甲醇至50 ml，摇匀，精密吸取1 ml甲醇定溶于10 ml容量瓶中，再精密吸取1 ml甲醇定溶于10 ml容量瓶中，稀释倍数为5000，作为药材供试品溶液。
2.5 精密度实验将8号样品制成的供试品溶液，按标准曲线项下操作重复测定6次，RSD为0.08%（n=6），说明精密度良好。
2.6 重现性实验 精密称取6份同一样品（8号），各约1.0 g，按供试品溶液制备项下进行制备，按标准曲线项下操作测定，RSD为0.73%（n=6），说明重现性好。
2.7 稳定性实验对8号供试品溶液在0，1，2，3，4，5 h按标准曲线项下操作各测定1次，RSD=1.05%（n=6），说明样品溶液在5 h内基本稳定。
2.8 回收率实验采用加样回收法。精密称定6份8号样品各约0.5 g，分别精密加入绿原酸对照品2，4，6 mg（3个水平共6份），按供试品溶液制备项下进行制备，按标准曲线项下操作。结果见表1。