HPLC测定不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量
作者：胡华杰 楼招欢 吕圭源 陈素红。
【摘要】 ［目的］采用HPLC法测定不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量。［方法］色谱柱：XBC18分析柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相：乙腈水，梯度洗脱，流速为1.0mL·min—1。［结果］欧前胡素在0.0552～0.276μg范围内线性关系良好，平均加样回收率为99.5%，RSD为1.3%；异欧前胡素在0.048～0.24μg范围内线性关系良好，平均加样回收率为98.6%，RSD为1.7%。不同产地的白芷饮片中欧前胡素含量在0.046%～0.145%之间，异欧前胡素在0.038%～0.087%之间，两者之和在0.084%～0.232%之间。安徽产最低，浙江杭州产最高。［结论］不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量存在差异。含量测定方法准确、快速、重复性好，适用于白芷及其制剂的质量控制。
Abstract： ［Objective］ To determine the contents of imperatorin and isoimperation in Angelicae dahuricae from different sources by HPLC，and prove some scientific evidence for processing standardization and quality control of Angelicae dahuricae decoction pieces.［Methods］ An HPLC method was established.XBC18 column was used，with mixture of acetonitrile and water in a gradient mode.The flow rate was 1.0mL·min—1.［Result］ The calibration curve of imperatorin was in good linear over the range of 0.0552～0.276μg with the average assay recovery 99.5%.The calibration curve of isoimperatorin was linear over the range of 0.048～0.24μg with the average assay recovery 98.6% （RSD=1.7%）.The contents of imperatorin from different sources in Angelicae dahuricae were between 0.046%～0.145%，isoimperatorin was between 0.038%～0.087%，the total was between 0.084%～0.232%.［Conclusion］ This method was proved to be rapid，reproducible and accurate.It is suitable for the quality control of Angelilae dahuricae and its preparation.
Key words：Angelica dahurica; imperatorin; isoimperatorin; HPLC 白芷为伞形科植物白芷Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica（Fisch.ex Hoffm.）Benth.et Hook.f.var.formosana（Boiss.）Shan et Yuan 的干燥根。白芷中主要有效成分为香豆素类化合物，药理实验表明其具有抗菌消炎、解热镇痛、降低动脉压力及离体蛙心收缩力等作用，具有较强的生理活性，欧前胡素和异欧前胡素为其中的主要化学成分之一［1］。本实验通过测定不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量。
1 材料。
1.1 药物与试剂。
白芷饮片购自各地药店和药房，产地分别为浙江金华、浙江杭州、安徽、四川；欧前胡素（批号：110826200712）和异欧前胡素对照品（批号：110827200407）均购于中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
1.2 仪器。
Agilent 1200 高效液相色谱系统；VWD检测器；AG135电子天平（瑞士梅特勒托利多公司）；超声波清洗器（上海申波超声公司）。
2 方法与结果。
2.1 色谱条件。
色谱柱：XBC18分析柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：A（水）C（乙腈），梯度洗脱，起始浓度为95%A～5%C，在50min时达到35%A～65%C，最后在70min时达到5%A～95%C；流速：1ml·min—1；检测波长：254nm，柱温：30℃。在此条件下，欧前胡素、异欧前胡素与白芷饮片中其他成分能达到基线分离，理论塔板数按欧前胡素峰计算不低于3000。见图1、图2。
精密称取欧前胡素、异欧前胡素对照品1.38mg和1.20mg，置于25ml容量瓶中，加甲醇配制成浓度分别为0.0552 mg·min—1和0.048 ml·min—1的混合对照品溶液，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备。
取白芷粉末（过3号筛）约1.000g，精密称定，置锥形瓶中，加70%乙醇25ml，称重，超声30min，取出，放冷，补足失重，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.4 标准曲线的绘制。
精密吸取混合对照品溶液以不同体积注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。以对照品的进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归计算，其方程为：欧前胡素 Y=5.53×103x+27.31（r=0.9995），在0.0552～0.276μg范围内线性关系良好；异欧前胡素Y=4.68×103x+19.62（r=0.9995），在0.048～0.24μg范围内线性关系良好。
2.5 精密度实验。