高效液相色谱蒸发光散射检测法测定补气养血口服液中黄芪甲苷的含
作者：易爱玲，周从辉，熊义涛。
【摘要】 目的建立用高效液相色谱—蒸发光散射检测法测定补气养血口服液中黄芪甲苷的含量测定方法。方法采用Kromasil ODS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈－水（32∶68）；流速为1.0 ml·min—1；柱温：40℃；ELSD参数：漂移管温度100℃，氮气流速：2.5 ml·min—1。结果黄芪甲苷在2.248～11.240 μg范围内线性关系良好，r＝0.999 6；平均回收率99.8%，RSD为1.2%。结论该方法简便、准确，重复性好，适用于补气养血口服液的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱 蒸发光散射检测法 黄芪甲苷 补气养血口服液。
Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC—ELSD method for determination of astragaloside IV in Buqiyangxue Oral Liquor. Methods The chromatographic coniditions included the Kromasil ODS—C18 (4.6 mm×250 mm, 5μm) chromatographic column and mobile phase consisted of acetonitrile—water (32∶68), the flow rate was 1.0 ml·min—1. Column temperature was 40℃,ELSD parameter; drift tube temperature was 100℃ and the flow rate of nitrogen was 2.5 ml·min—1.ResultsAstragaloside IV showed a good linearity with the range from 2.248～11.240 μg, r=0.999 6; the average recovery was 99.8% with RSD 1.2%.ConclusionThe method is simple, reproducible, and it can be used for the quality control of Buqiyangxue Oral Liquour.
Key words：HPLC—ELSD; Astragaloside IV; Buqiyangxue Oral Liquor 补气养血口服液由黄芪、大枣、枸杞、麦冬等中药制成，具有补脾益气的功能［1］。黄芪是君药，其主要成分为黄芪甲苷，控制黄芪的质量，即可控制本品的质量。有关黄芪甲苷的分析方法报道，有薄层—紫外分光光度法、薄层扫描法等。但大部分是测定生药及其制剂中的黄芪甲苷，用于测定中药口服液报道较少。补气养血口服液为液体制剂，药物吸收快，作用迅速，且易于分剂量，服用方便，特别适用于儿童和老年患者。为了更好地控制成品的质量，在原标准的基础上，对补气养血口服液中黄芪甲苷的质量标准进行了详细的研究，增加了高效液相色谱—蒸发光散射检测器测定黄芪甲苷的含量［2］，并进行了方法学考查。
1 仪器与试药。
1.1 仪器。
惠普HP1100系列液相色谱仪美国安捷伦公司，Alltech—ELSD蒸发光散射检测仪（美国奥泰公司）。
1.2 试药。
黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110781—200512；规格：20 mg），补气养血口服液样品（武汉联合药业有限公司提供，批号20050301；规格10 ml/支），实验中所用试剂水为重蒸馏水，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果。
2.1 色谱条件。
Kromasil ODS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱；Chemstate色谱工作站；流动相为乙腈－水（32∶68）；流速为1.0 ml·min—1；柱温：40℃；ELSD蒸发光散射检测器检测参数：漂移管温度100℃，氮气流速：2.5 ml·min—1。理论板数按黄芪甲苷峰计应不低于3 000［3］。在该色谱条件下对照品、样品和阴性对照品的色谱图分别见图1～3。
2.2 溶液的制备。
2.2.1 对照品溶液取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h黄芪甲苷对照品适量精密称定，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的对照品溶液，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液精密量取本品25 ml，用水饱和的正丁醇振摇提取4次,20 ml/次，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，20 ml/次，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 ml使溶解，放冷，通过D101型大孔树脂柱（内径1.5 cm，长12 cm），以水50 ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇50 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。