免疫组化关键步骤、常见问题和解决方案
精品论 参考献 免疫组化关键步骤、常见问题和方案 （南京市医院病理科 江苏 南京 000）【摘要】 免疫组织化学技术是广泛应用临床病理实验室项基技术操作简单灵敏高特异性强对辅助临床治疗方案和鉴别诊断都有特别应用价值。
但是要保证每批实验结准确性、可靠性就要每次操作细节并要日积月累验总结。
下面是人对免疫组化些细节问题体会。
【关键词】 免疫组化；问题；方案材和方法【图分类】R39 【献标识码】 【编】09575（05）303370 免疫组化技术已广泛应用临床病理实验室几乎各三甲医院都开展了免疫组化技术辅助病理诊断和临床治疗、化疗方案提供了很助但是要保证每批实验结真实性、可靠性确实比较难因不医院做出免疫组化结偶尔会发现不太样这就对我们技术人员有很高要那就是要每次操作细节并要日积月累验总结笔者从事病理技术工作近0年做了近万项免疫组化片子对免疫组化染色关键步骤常见问题和方案都些深刻体会就这些容总结下。
临床 我院免疫组化制片年近500项包括肠癌标、胃癌标、乳腺癌标、质瘤标、神分泌癌标淋巴瘤标都要进行免疫组化染色助临床辅助化疗和鉴别诊断。
对每次做完批免疫组化我们都会进行质控。
质控主要目是发现假阴性或阳性定位是否准确是否有非特异性背景染色下面是笔者工作程发现些必须问题。
标取材前固定应问题 了达到保存良组织形态结构防止组织溶和保存某些特殊抗原目要对组织进行及固定。
手术切下标要尽早把他放入固定液对些器官或组织要剖开固定固定液采用0%性缓冲甲醛液。
固定对抗原影响固定不足使组织心部位些抗原溶、弥散、丢失而固定长抗原掩盖程就重也不能获得良免疫组化染色结。
标取材、固定、脱水、透明浸蜡应问题 对要做免疫组化标取材要与常规略有不组织不能以免浪费试剂组织也给操作带不便特别是画圈也不画因组织盖满了整玻片就没有画圈空隙。
现部分医院都用全动组织脱水机要常进行质控常更换脱水液透明液保证组织脱水、透明充分浸蜡温不要高否则将破坏某些抗原成分。
3 脱蜡至水洗应问题 脱蜡液应常更换必须保证脱蜡干净彻底水洗充分水洗切片应放蒸馏水清洗～遍脱蜡不干净不彻底就会出现非特异性着色影响染色效即阳性强也会减低。
抗原修复应问题 目前常用抗原修复液有两种即00柠檬酸缓冲液（60）和缓冲液（90或80）对些胞浆阳性或胞膜阳性抗体选择柠檬酸缓冲液比较而对些胞核阳性抗体选择缓冲液比较。
配置修复液必须用蒸馏水否则染色会失败部分抗体都会出现假阴性。
抗原修复方法目前比较常用是高压锅喷气～3分钟火（0℃～0℃）。
然冷却如要节省可用水冲洗高压锅外面等到压力降下再把高压锅锅盖打开放冷水冷却途可换次水这样既节省用水又可节约等到高压锅水温接近常温就可直接用水冲洗切片[]。
5 滴加抗体前和滴加抗体应问题 切片冲洗应放蒸馏水拿出画圈画圈应圆圈与组织必须保持距离否则会产生边缘效应即圆圈旁组织会产生非特异性染色。
画圈用B冲洗切片画完圈尽量不要让切片干燥画完圈也不能立冲洗要等油干燥再冲洗否则油就冲了就不能起到防止抗体外溢效。
用蒸馏水配置B加些吐温或垢剂有利冲洗更干净也有利滴加完抗体抗体弥散速抗体弥散速快操作简便节约。
抗孵育可选择37℃温箱或℃冰箱夜而二抗孵育般都是室温添加二抗前和显色前B都必须彻底冲洗干净否则会产生非特异性着色。
当制作批切片可以批量滴加显色液先用肉眼观察组织是否变黄若变黄可镜下控制每种抗体显色背景着色能都不太样具体可镜下控制积累验。
般显色控制～0分钟。
7 苏木素村染应问题 既然是村染就要苏木素染色不应深只要胞核淡淡着色就。
村染也应保证脱水、透明彻底否则会有水珠影响观察。
封片不要有气泡是湿封这样会减少显微镜下观看有裸核发生性树胶量要把握不能多或少般视盖玻片和组织而定以免溢胶或封不完全[]。
结论 免疫组化技术虽然操作简单但是要保证每批切片染色结准确性可靠性要从各环节各细节把握也要不断总结发现问题积累验常进行学术交流特别是对抗选择要长期试验总结对浓缩型抗体配置则要到合适抗体稀释那就要做对照试验。
【参考献】[] 任学军,江昌新 煮沸法石蜡切片抗原修复应用探讨[]天津医科学学报,0,(0)0809[] 孙青,张传森 病理诊断与技术操作手册[]济南山东学出版社,009900 相关热词 关键步骤思路和要常见问题免疫步骤