茎叶人参皂苷对大鼠急性肺损伤肺组织TNF—α含量及IL—8表达的干预
作者：毛毅敏，孙瑜霞，王学廷，单世民。
【摘要】 摘要：目的研究茎叶人参皂苷对内毒素（LPS）诱导大鼠急性肺损伤（ALI）肺组织肿瘤坏死因子—α（TNF—α）含量及白细胞介素—8（IL—8）表达的干预作用。方法采用内毒素诱导急性肺损伤大鼠模型，随机分为正常对照组（NS组），模型组（ALI组），皂苷组（GS组）。观察茎叶人参皂苷对内毒素诱导大鼠急性肺损伤肺组织TNF—α含量及IL—8表达的影响。结果①与NS组比较，ALI组肺组织TNF—α显著增高(P0.01)；与ALI组比较，GS组肺组织中TNF—α显著低于ALI组(P0.01)。②与NS组比较，ALI组IL—8的表达增高（P0.05）；与ALI组比较，GS组表达减低，差异有统计学意义（P0.05）。结论茎叶人参皂苷可降低肺组织中TNF—α的含量，抑制急性肺损伤大鼠肺组织IL—8的表达。
【关键词】 急性呼吸窘迫综合征； 急性肺损伤； 茎叶人参皂苷； 内毒素； 肿瘤坏死因子—α； 白细胞介素—8。
急性肺损伤ALI/ARDS实际上是一种炎症反应，炎症因子增高伴有抗炎因子表达的下降是其发病机制的关键。肿瘤坏死因子（TNF—α）作为主要的前炎性因子，是炎性反应中释放最早和最重要的内源性介质。白细胞介素—8（IL—8）属于炎症介质，是一种具有活化、趋化作用的细胞因子，研究表明白细胞介素—8是ALI/ARDS发病机制的一个重要环节。本研究旨在通过内毒素诱导急性肺损伤模型的复制，通过检测肺组织TNF—α及肺IL—8水平，探讨茎叶人参皂苷是否能通过影响细胞因子的水平进而有效地减轻ALI时的炎症反应。
1 材料。
清洁级健康Sprague Dawley(SD)大鼠45只，体质量（300±40）g，由河南省实验动物中心提供［实验动物生产许可证号：SCXK(豫)2008—0017，实验动物使用许可证号：SYXK(豫)2008—0105］。内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS，E.coli O55B5)由美国Sigma公司提供；茎叶人参皂苷粉剂(stems and leaves Ginsenoside)由辽宁大自然生物科技公司提供；白细胞介素—8(interleukin—8)兔抗鼠单抗由上海麦莎生物科技公司；TNF—α放射免疫药盒由上海赛百胜生物工程公司提供。
2 方法。
2.1 分组及模型建立。
清洁级SD雄性大鼠45只，体质量（300±40）g，以随机数字法分3组：正常对照组（NS组），模型组（ALI组），皂苷组（GS组），每组15只；大鼠禁食6 h，自由饮水，称重后，暴露尾静脉，各组注药均由尾静脉注入。NS组和ALI组注入生理盐水1 ml，GS组注入茎叶人参皂苷溶液（生理盐水稀释）100 mg·kg—1·ml—1，45 min后，NS组大鼠尾静脉注入1 ml生理盐水，ALI组、GS组均将LPS 5 mg/kg溶解于1 ml生理盐水由尾静脉注入。
2.2 观察指标5 h后，观察各组大鼠的一般状况；腹主动脉取血（1∶500 U肝素抗凝）行血气分析，腹主动脉放血处死大鼠；取大鼠左下肺组织计算肺系数；取左上肺进行TNF—α测定；取右肺组织肉眼观察和病理HE染色200×光镜下观察；免疫组化SABC法检测各组肺组织白细胞介素—8,病理图像分析系统测定肺组织中IL—8的平均灰度值。
2.3 统计学计量资料数据以±s表示。采用单因素方差分析（one—way ANOVA）进行组间比较，以最小显著差异法（LSD法）进行不同组别之间的两两比较。采用SPSS13.0统计软件进行数据处理。
3 结果。
3.1 肺损伤指标ALI组PaO2明显低于NS组（P﹤0.01），肺系数明显高于NS组（P﹤0.01）；GS组PaO2较ALI组有所增加（P﹤0.01），而肺系数也较ALI组减低（P﹤0.01）。结果表1。表1 茎叶人参皂苷溶液对LPS致ALI大鼠PaO2及肺系数的影响(略)。
3.2 病理变化。
3.2.1 肺大体观察打开胸腔，暴露肺组织后观察，NS组大鼠肺组织表面光滑，呈淡粉红色，无充血水肿及梗死灶，触之弹性较好；ALI组大鼠肺组织呈现暗红色，肺包膜下明显充血水肿，可见广泛出血点，弹性较差；GS组大鼠可见肺组织，色泽暗红，充血水肿，有散在出血点，但较ALI组少。
3.2.2 光镜下镜下可见NS组肺组织结构清晰，无充血渗出，未见明显炎性细胞浸润；ALI组可见肺微血管充血、出血、微血栓形成，肺间质和肺泡内有水肿液和中性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞浸润，部分可见灶状肺不张；GS组病理学改变可见肺微血管充血、出血及炎症细胞浸润，但比ALI组稍轻。
3.3 肺组织TNF—α的含量ALI组肺组织TNF—α的含量高于NS组(P0.05)；GS组肺组织中TNF—α低于ALI组（P0.05）。结果见表2。表2 茎叶人参皂苷对LPS致ALI大鼠肺组织TNF—α水平的影响(略)。
3.4 IL—8L—8主要表达于肺组织的单核巨噬细胞胞浆中和肺间质中，呈棕黄色颗粒或肺间质黄染；ALI组的表达最多，其次为GS组，NS组表达最少（见图1）。平均灰度值，NS组的IL—8的表达与其他两组比较差异有统计学意义（P0.05），与ALI组比较，GS组的IL—8的表达减少，有统计学意义（P0.05）。结果见表3。表3 茎叶人参皂苷对LPS致ALI大鼠肺IL—8表达的影响(略)。