脑康灵口服液对偏头痛大鼠神经细胞凋亡的影响

作者：李新田，邱财荣，林 昱，邱 瑾。

【摘要】 目的 研究 脑康灵口服液对偏头痛大鼠神经细胞凋亡的 影响 。 方法 采用硝酸甘油偏头痛模型大鼠，运用透射电镜和流式细胞仪技术进行研究。结果 脑康灵口服液可改善硝酸甘油型偏头痛大鼠神经细胞超微结构异常，降低总体细胞凋亡发生率和神经细胞凋亡百分率。结论 说明脑康灵口服液对硝酸甘油型偏头痛大鼠神经细胞凋亡具有抑制作用。 【关键词】 脑康灵口服液；偏头痛；细胞凋亡；大鼠 【Abstract】 Objective To study the effects of Naokang ling oral liquid on nerve cell apoptosis of migraine model rat.Methods To choose disease model of migrane with nitroglycerin by means of flow cytometry and transmission electron microscope. Results Naokang ling oral liquid can adjust the abnormal ultramicro—structure of nerve cell of migraine model rats，decrease the incidence and the apoptosis percentage.Conclusion Naokang ling oral liquid can block the nerve cell apoptpsis of migraine model rat.

论文代写 【Key words】 naokang ling oral liquid；migraine；apoptosis；rat 脑康灵口服液是由天麻、当归、川芎、丹参、地龙、钩藤等组成，临床用于 治疗 颅脑外伤引起的头痛、头晕、恶心、呕吐等。 目前 ，国内外学者对偏头痛发病机制分别从血管、神经、免疫、基因表达及微量元素等方面进行了研究，取得了可喜的成果，但有些 问题 还需要进一步探讨。为此，本文采用透射电镜和流式细胞仪技术在脑康灵口服液（naokang ling oral liquid，NKL）对硝酸甘油型偏头痛大鼠神经细胞形态学、凋亡情况、凋亡率及凋亡峰等方面的影响进行了研究。1 材料 1.1 药物 NKL口服液，由本院药剂科提供。麦角胺咖啡因片（cafergot，CFG），每片含酒石酸麦角胺1mg(由上海信谊药业有限公司生产，生产批号：000401)。硝酸甘油注射液（nitroglycerin injection，NTG）每1ml含硝酸甘油5mg(由广州明兴制药厂生产，生产批号：000505)。实验时用注射用水配制成所需浓度。 1.2 试剂 碘化丙啶(PI)，Sigma公司；RNAse A，QIAGEM公司；TritoX—100，E.MERCK公司；其余试剂均为市售 分析 纯。 1.3 仪器 LKBⅢ型超薄切片机(瑞典)；日立H—600型透射电镜(日本)；COULTERESP型流式细胞仪(美国)。 毕业论文 1.4 动物 SD大鼠，体重250～280g，由西安医科大学实验动物中心提供(医动字第8—005号)。 2 方法 2.1 样品制备 取健康SD大鼠48只，雌雄各半。随机分为6组，即正常组、模型组、CFG组、NKL 3个剂量组，每组8只。参照Cristina、Tassorelli等［1，2］报道的方法，复制硝酸甘油型SD大鼠偏头痛动物模型。除正常组外，其余各组动物sc硝酸甘油注射液10mg/kg。造模30min后按每组ig给药。 正常组不作处理，模型组ig 注射用水10ml/kg，CFG组ig CFG药液10ml/kg，NKL3个剂量组分别ig相应浓度的NKL药液10ml/kg。造模4h每只大鼠ip 40mg/kg戊巴比妥钠进行麻醉。尽量放血，断头，剪开颅骨，取出脑组织，除去脑膜和血管。每只大鼠均取同一部位的脑组织块（大脑皮层部位），备用。 2.2 凋亡细胞形态学观察［3］ 取健康SD大鼠36只，雌雄各半，随机分为6组，每组6只。样品制备方法同2.1。将取材的新鲜脑组织块，加入3%戊二醛中，固定30min，用0.1mmol/L PBS漂洗，1%锇酸溶液固定30min，梯度丙酮脱水，环氧树脂Epon812渗透包埋，70℃过夜聚合；LKBⅢ型超薄切片机切片，切片厚度为60nm；醋酸双氧铀—枸橼酸铅双重染色；日立H—600型透射电镜观察摄影。观察区域有暗细胞（系凋亡前细胞）、凋亡细胞和凋亡小体者，均属于大脑皮层神经元发生凋亡。记录神经细胞发生凋亡的动物例数，并对各实验组动物神经细胞凋亡发生率进行统计分析。质反应资料采用χ2检验分析，其中，χ26.635时，P0.01；χ23.841时，P0.05；χ23.841时，P＞0.05。实验结果由正常组与模型组比较、给药组与模型组比较中得出。

2.3 凋亡细胞计数［4］ 取健康SD大鼠48只，雌雄各半，随机分为6组，每组8只。样品制备方法同2.1项。将取材的新鲜脑组织块用PBS液漂洗，用剪刀剪碎成1mm3大小的碎块，加入适量0.5%TritonX—100裂解组织后，收集细胞悬液，1000r/min离心10min弃上清液。细胞用0.1mmol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）洗2次并悬浮之，加入终浓度为50mg/L的RNAseA，37℃恒浴1h，再加入PI染液至终浓度50mg/L。摇匀后4℃避光静置1h，经尼龙网过滤，调整细胞浓度为1×106个/ml。在COULTER ESP型流式细胞仪上计数10000个细胞，氩离子激发光波长为488nm，测定各期细胞DNA含量、凋亡峰，并 计算 凋亡细胞百分率。 2.4 统计学处理 计量资料实验数据采用SPSS9.0统计软件对实验数据进行处理。实验结果由模型组和正常组进行比较，各给药组与模型组进行比较中得出。 毕业论文。