延胡索中紫堇碱标准品的制备及含量测定

作者：白雪 肖海涛 杨杰 朱洁 郝小燕。

【摘要】 　　目的研究延胡索中紫堇碱标准品的制备及含量测定方法。方法运用半制备高效液相色谱法分离纯化紫堇碱，采用薄层色谱法和高效液相色谱面积归一化法检测纯度，波谱法鉴定其结构，反相高效液相色谱法测定延胡索药材中紫堇碱的含量。结果制备的化合物鉴定为紫堇碱，纯度为99.5％；含量测定在0.131 2 ～1.131 2 μg范围内呈良好线性关系，r = 0.999 997，平均回收率为97.19％，RSD为2.25％（n = 9）。结论该制备方法效率高，所得化合物纯度高，可用于大量制备；含量测定方法准确，简便，可靠，重复性好。

【关键词】 紫堇碱； 半制备高效液相色谱法； 反相高效液相色谱。

Abstract：ObjectiveTo study a preparation and determination method of corydaline in Corydalis yanhusuo W. T. Wang. MethodsThe corydaline was separated and purified by semi—preparative high performance liquid chromatograph. Its purity was determined by TLC and HPLC analysis and normalization of peak areas. The structure of corydaline was identified by spectrum, and the quantification was determined by RP—HPLC. ResultsThe compound was identified as corydaline .The purity of the corydalis was 99.5％. There was a good linearity within the range of 0.131 2～1.131 2 μg (r= 0.999 997)．The average recovery was 97.19％(RSD=2.25％，n=9) . ConclusionThis preparation method is quick and convenient for producing the pure compounds from herbs with large capacity. The method is accurate and simple with good reproducibility, and it can control the quality of this herb and preparation effectively.

Key words：Corydaline; Semi—preparative high performance liquid chromatograph； RP—HPLC 　　延胡索Corydalis yanhusuo W. T. Wang.为罂粟科植物延胡索的干燥块茎，具有活血化淤、理气止痛的功效，是我国传统常用中药。延胡索中主要含生物碱，其中延胡索乙素和丑素是延胡索镇痛的主要活性成分［1］，2005年版《中国药典》及成方制剂中均采用延胡索乙素为对照品进行评价［2~4］。本课题组研究发现，延胡索生物总碱具有较好的抑制乙酰胆碱酯酶的作用，其中紫堇碱是主要活性成分之一，因此，有必要对延胡索中紫堇碱进行定性鉴别和含量测定。但是，目前市场上还没有紫堇碱对照品的销售，并且也未见采用紫堇碱为对照品来评价延胡索质量的报道。本文报道延胡索中紫堇碱对照品的制备方法和含量测定方法。

1 仪器与材料 　　X—4型显微熔点仪（国产，温度计未校正)；INOVA—400型核磁共振仪 (TMS为内标)； KQ—250B型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；高效薄层层析板(GF254，青岛海洋化工厂生产)；甲醇、乙睛为色谱醇，其他化学试剂均为分析醇，水为纯净水。 　　延胡索药材采自浙江省东阳市，经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W. T. Wang.的干燥块茎。

2 方法与结果。

2.1 紫堇碱粗提物的制备 延胡索块茎粗粉5 kg，用30倍量的70％乙醇40 ℃超声提取1 h，滤过，滤液减压回收溶剂，得乙醇提取浸膏。乙醇提取浸膏加入1％的盐酸溶液溶解，滤过。滤液用浓氨水调pH 9~10，用乙醚反复萃取，合并萃取液，减压低温回收溶剂，得紫堇碱粗提物。

2.2 色谱条件。

2.2.1 制备的HPLC色谱条件 XTerra Prep RP—18柱（10 μm ,150 mm × 7.8 mm）；柱温为室温；检测波长280 nm；流动相为甲醇—0.03 mol/L的磷酸二氢钠(61∶39)；流速3.00 ml/min。

2.2.2 分析的HPLC色谱条件 DiamonsilTM C18柱 (5 μm, 250 mm× 4.6 mm)，柱温30 ℃；检测波长280 nm，流动相为0.10 ％ 的磷酸(三乙胺调pH = 6.0) —乙睛(48∶52)，流速1.00 ml/min。

2.2.3 紫堇碱对照品的制备纯化 取紫堇碱粗提物1.0 g，用10 ml甲醇超声溶解，过0.45 μm滤膜，备用。吸取1.0 ml样品进半制备型高效液相色谱仪，收集保留时间所在的组分，减压回收溶剂，得紫堇碱粉末。加乙醇适量溶解，重结晶，即得。

2.3 纯度分析。

2.3.1 薄层色谱分析 薄层板：高效薄层层析板(GF254)。3种展开剂系统：正丁醇—乙酸—水（10∶1∶0.5）；醋酸乙酯—氯仿—甲醇—二乙胺(8∶2∶2∶1)；乙醚—环己烷—甲醇（5∶3∶0.5）。点样：在同一板上，按20，40，60，80，100 μl不同的浓度点样。展距8 cm，定位后经紫外254 nm、碘蒸气及碘化铋钾溶液显色检视。结果在薄层色谱同一位置处，均为单一斑点，未见杂质斑点，符合化学品要求。

2.3.2 紫外检测 取紫堇碱对照品乙醇溶液经紫外光谱扫描，结果表明最大吸收波长为280 nm，因此，确定280 nm为测定波长。