HPLC法测定左卡尼汀注射液含量及有关物质

作者：闵翠娥，陆媛，江少仪，谭胜连。

【摘要】 目的 建立测定左卡尼汀注射液含量及有关物质的方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱：MCPack NH2色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流动相：0.05 mol·L—1磷酸盐缓冲液乙腈(体积比35∶65)，磷酸调节pH至4.3;检测波长：205 nm;流速：1 mL·min—1;柱温：30 ℃。结果 左卡尼汀在1.04～8.30 mg·mL—1质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 9;高、中、低3种浓度的平均回收率为100.7%，RSD为1.4%。左卡尼汀的检测限为3 ng，有关物质(E)4(三甲基氨基)2丁烯酯或(Z)4(三甲基氨基)2丁烯酯的检测限为0.02 ng。结论 该法简便、准确、灵敏度高，重现性好，适用于左卡尼汀注射液的质量控制。

【关键词】 高效液相色谱法;左卡尼汀;注射液;有关物质;质量控制。

Abstract:Objective To establish a HPLC method for the determination of levocarnitine Injection and its related substances.Method The HPLC was carried out on a YMCPack NH2(150 mm×4.6 mm,5μm) column with a flow rate of 1.0 mL·min—1 at column temperature 30 ℃，of which the mobile phase was consisted of 0.05 mol·L—1 solution of phosphate buffer and acetonitrile (35∶65,pH4.3) and the detected UV wavelength was 205 nm. Results The calibration curve was linear (r=0.999 9) in the range of 1.04～8.30 mg·mL—1 for levocarnitine,and the average recovery was 100.7%,with RSD 1.4%. The limit of detection was 3 ng for levocarnitine and 0.02 ng for its impurity A. Conclusion It is an accurate,simple,rapid,qualitative method with good reproducibility for the determination of levocarnitine and its related substances.

Key words:HPLC;Levocarnitine; Injection; related substances; quality control。

左卡尼汀是一种能量代谢所需的体内天然物质，其主要功能是促进脂类代谢，在细胞相互作用，抗氧化、改变膜性质及调节免疫应答等方面也具有重要作用，已广泛应用于医疗、保健、食品和饲料添加剂等领域。目前文献报道的左卡尼汀含量测定方法有几种，但均有不足之处。我们采用文献[1]所收载的HPLC法，选用不同的C18柱、pH值或流动相比例均难以分离左卡尼汀主成分和杂质A[(E)4(三甲基氨基)2丁烯酯或(Z)4(三甲基氨基)2丁烯酯];文献[2]采用酶法，操作繁杂，干扰因素多，重复性差;美国药典[3]采用的HPLC法，分析时间长(3 h)，且基线很难平衡。而欧洲药典[4]、英国药典[5]收载的左卡尼汀原料中有关物质检查的HPLC法，所选用的色谱柱为丙胺基甲基硅烷键合硅胶柱(aminopropylmethylsilyl silica gel)，在国内尚未找到相应的色谱柱。本文在欧洲药典[4]、英国药典[5]左卡尼汀原料有关物质测定方法的基础上，结合美国药典[3]左卡尼汀注射液的含量测定方法，建立了左卡尼汀注射液含量及有关物质的测定方法。

1 仪器与试药。

日本岛津LC10A高效液相色谱仪(LC10AT泵、SPD10A紫外可见检测器、CTO10A柱温箱、HW2000工作站),sartorius PB21酸度计,Metler Toledo AG135电子天平。

左卡尼汀对照品(USP，批号：1359903，质量分数100%)、杂质A对照品(EP，批号：BP907F67029，质量分数100%)。左卡尼汀注射液分别由本公司(规格：5 mL∶1.0 g，批号：080301、080302、080303)和意大利SigmaTau公司(规格：5 mL∶1.0 g，批号：070864)提供。乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果。

2.1 溶液的制备。

2.1.1 供试品溶液的制备 精密量取本品适量,加流动相制成每1 mL中约含左卡尼汀5 mg的溶液，即得。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取左卡尼汀对照品适量，加流动相制成每1 mL中约含有左卡尼汀5 mg的溶液，即得。

2.2 色谱条件及系统适用性试验。

色谱柱：YMCPack NH2 柱(4.6 mm×150 mm，5μm);流动相：0.05 mol·L—1磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾6.81 g,加水溶解并稀释至1 000 mL，摇匀)乙腈(体积比35∶65)，磷酸调节pH值至4.3;流速：1 mL·min—1;柱温：30 ℃;检测波长：205 nm;进样量：20 μL。分别取左卡尼汀对照品、杂质A对照品适量，加流动相配制成含左卡尼汀5 mg·mL—1、杂质A 0.025 mg·mL—1的溶液，取20 μL，进样，记录色谱图。理论塔板数按左卡尼汀峰计算为804 9，拖尾因子1.12，左卡尼汀与杂质A分离度为2.6。见图1。

2.3 专属性试验。

分别取空白辅料溶液及“2.1”项下的供试品溶液、对照品溶液各20 μL，进样，结果表明空白辅料不干扰左卡尼汀含量测定。见图2。

2.4 破坏试验。

2.4.1 酸破坏 精密量取本品1 mL，置20 mL容量瓶中，加1 mol·L—1的盐酸溶液2 mL，放置2 h，用1 mol·L—1的氢氧化钠溶液中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样20 μL。结果见图3。

2.4.2 碱破坏 精密量取本品1 mL，置20 mL容量瓶中，加1 mol·L—1的氢氧化钠溶液2 mL，放置1 h，用1 mol·L—1的盐酸溶液中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样20 μL。结果见图3。

2.4.3 氧化破坏 精密量取本品1 mL，置20 mL容量瓶中，加质量分数30% H2O2 3滴，放置1 h，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样20 μL。结果见图3。

2.4.4 光照破坏 精密量取本品1 mL，置20 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，置4 500 LX照度下放置24 h，进样20 μL。结果见图3。

由图可知，本品在强酸、光照条件下较稳定，氧化破坏产生杂质3，碱破坏产生杂质4。通过对左卡尼汀注射液主成分、降解产物进分离检测，分离度均符合要求，不干扰左卡尼汀含量及有关物质测定。