不同来源降香中柚皮素与异甘草素含量的高效液相色谱测定
作者：孙丽丽，王蕾，郭丽冰，沈志滨。
【摘要】 目的建立高效液相色谱（HPLC）法测定降香中柚皮素和异甘草素含量的方法，比较不同来源的11批降香药材中的柚皮素和异甘草素的含量。方法采用HPLC法测定，以甲醇—0.2%磷酸水(60∶40) 为流动相，检测波长为372nm（柚皮素）和290 nm（异甘草素）。结果柚皮素在0.948～4.740 μg范围内线性关系良好，r=0.999 9；异甘草素在1.432～10.024 μg范围内线性关系良好，r=0.999 9。降香中的柚皮素含量在2.585～5.429 mg/g之间；异甘草素含量在7.526～28.329 mg/g之间。结论不同来源的降香药材中的柚皮素和异甘草素含量差异较大。该方法操作简便、快速、重复性好，适用于降香的质量控制。
降香Lignum dalbergiae Odoriferae主要含有挥发油和黄酮类成分。《中国药典》中对于降香的质量控制仅限于规定降香醇溶性浸出物不得少于8.0%［1］，但是对单一成分未有明确的定量方法。本课题组对降香黄酮类成分进行了研究，从中分离得到7个化合物［2］。本文用自制的柚皮素和异甘草素为指标，建立HPLC含量测定方法，并测定了11个不同来源的降香药材中的柚皮素和异甘草素含量。
1 仪器与试药 Waters高效液相色谱仪（四元泵，二极管阵列检测器，自动进样）；柚皮素、异甘草素对照品（实验室自制，经UV、1H—NMR鉴定结构，HPLC检测，面积归一化法计算，纯度大于98%）；甲醇为色谱纯、乙醇等试剂为分析纯。 本实验所用降香样品的来源见表1。表1 不同来源降香样品（略）。
2 方法与结果。
2.1 对照品溶液的制备精密称取柚皮素对照品4.74 mg于5 ml容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，配制成质量浓度为0.948 mg/ml溶液，再经0.45 μm滤膜滤过得柚皮素对照品溶液。 精密称取异甘草素对照品7.16 mg于5 ml容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，配制成质量浓度为1.432 mg/ml溶液，再经0.45 μm滤膜滤过得异甘草素对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备按照正交实验的结果，精密称取各样品粗粉2 g，在90℃下用70%乙醇提取3次，1.5 h/次，合并提取液，蒸干。残留物用70%乙醇溶解并定容至25 ml。经0.45 μm滤膜滤过得供试品溶液。
2.3.1 色谱条件色谱柱为迪马公司Diamonsil C18(200 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；流动相为甲醇—0.2%磷酸水(60∶40)；体积流量为1.0 ml/min；柚皮素的检测波长为372 nm，异甘草素的检测波长为290 nm；进样量为10 μl；柱温30℃。
2.3.2 检测波长的确定 紫外扫描柚皮素对照品溶液显示其最大吸收在372 nm处，异甘草素对照品溶液最大吸收为290 nm。因此以此波长作为含量测定的检测波长。
2.3.3 线性关系考察柚皮素工作曲线：按“2.3.1”项下色谱条件，分别吸取柚皮素对照品溶液1，2，3，4，5 μl进样测定，记录峰面积，结果见表2。以峰面积×10—6为纵坐标，样品量为横坐标绘制标准曲线并计算得回归方程为Y=5.570 6X —1.8206，r=0.999 9，线性范围是0.948～4.740 μg。表2 柚皮素进样量与峰面积（略） 异甘草素工作曲线：按“2.3.1”项下色谱条件，分别吸取异甘草素对照品溶液1，2，3，4，5，7 μl进样测定，记录峰面积。结果见表3。以峰面积×10—6为纵坐标，样品量为横坐标绘制标准曲线并计算得回归方程为Y=3.521 8X —1.575 2，r=0.999 5，线性范围是1.432～10.024 μg。表3 异甘草素进样量与峰面积（略）。
2.3.4 精密度考察精密吸取柚皮素对照品溶液5μl，按“2.3.1”项下色谱条件测定其峰面积，连续操作7次。测定结果为 =4.685μg，RSD=0.61%(n=7)。说明仪器精密度良好。