Survivin在肾透明细胞癌中的表达及其意义
作者：朱李兵，王禾，武国军，王栋。
摘要：目的 检测抗凋亡基因survivin在肾透明细胞癌中的表达情况及其与肾透明细胞癌生物学特性的关系。方法 收集53例肾透明细胞癌组织及8例正常肾组织，以免疫组织化学方法检测survivin蛋白表达；半定量RTPCR方法，检测肾透明细胞癌中survivin mRNA表达水平，与正常肾组织进行比较分析。结果 62.3%(33例)肾透明细胞癌组织表达survivin蛋白，而正常肾组织无1例阳性表达。RTPCR结果表明，survivin mRNA阳性表达率为56.25%(18/32)。Survivin表达与病理分级、临床分期、有无淋巴结转移等恶性生物学特性密切相关。结论 Survivin的高表达与肾透明细胞癌具有密切相关性，提示survivin对于肾透明细胞癌的预后可能具有重要意义。
ABSTRACT: Objective To detect the expression of survivin in suprarenal epithelioma(SRE) and elucidate its function in suprarenal epithelioma. Methods A total of 53 SRE specimens and 8 nomal nephridial tissues were obtained. Immunohistochemistry method was used to test protein expression of survivin. Semiquantitative RTPCR was used to measure survivin mRNA levels. Results Survivin protein were detected in 33 of 53(62.3%) SRE tissues. In contrast, no expression of survivin in nomal nephridial tissues was detected. The expression rate of survivin mRNA in tumor tissues (56.25%,18/32) was significantly higher than that in normal tissues(0,0/8). Conclusion Over expression of survivin is common in suprarenal epithelioma. Survivin may play an important role in SRE and is associated with prognosis.
KEY WORDS: suprarenal epithelioma; survivin; apoptosis。
肾癌是目前泌尿外科中常见的恶性肿瘤，而肾透明细胞癌占肾癌的70%—80%，它的发生与发展受到多种基因的调控。Survivin是一种细胞凋亡抑制因子，其在肿瘤发生中的作用近年来受到广泛关注。我们主要研究survivin在肾透明细胞癌中的表达情况，探讨其与肾透明细胞癌的病理分级、临床分期、淋巴转移等的相关性。
1 材料与方法。
1.1 标本 53例肾透明细胞癌组织手术切除标本，来自本院2004年10月至2005年8月间的肾癌手术患者，术后病理证实为肾透明细胞癌。按ROBSON临床分期，Ⅰ期16例，Ⅱ期17例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例。另取8例正常肾组织作对照。
1.2 试剂与仪器 Survivin单抗、生物素二抗、DAB显色系统由博士德公司提供；Trizol试剂购自Invitrogen公司；Survivin基因引物由北京三博公司合成；Leica Q570c 真彩图像分析仪(德国)；Nikon Eclipse E1000采图摄像系统(日本)。
1.3 免疫组化方法检测survivin蛋白表达 53例标本经100mL/L福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，4μm连续切片。免疫组化采用SABC法，石蜡切片常规脱蜡，梯度酒精至水，3%(体积分数)H2O2室温灭活30min， 微波抗原修复，正常山羊血清封闭30min，滴加一抗(1∶100)后4℃过夜，滴加二抗，DAB显色、脱水、透明、封片。用已知的阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。Survivin主要以胞核或伴有胞浆棕黄色为阳性显色。用Nikon Eclipse E1000采图摄像系统进行照相。
1.4 RTPCR法检测survivin mRNA的表达 取病例中的32例新鲜的肾透明细胞癌组织手术标本,分别取癌组织和远端的正常组织，使用Invitrogen 公司的Trizol 试剂，按照操作步骤提取组织总RNA。以此RNA为模板，加入2.5mmol/L oligo(dT) 16及M2MLV逆转录酶，在37℃水浴1h，85℃灭活10min。利用RTPCR 方法，以βactin 为内参照，同时在一个反应体系中加入survivin 和βactin 两种引物,在一致的条件下扩增。survivin：上游引物：5′CCCTGCCTGGCAGCCCTTTC 3′；下游引物：5′CTGGCTCCCAGCCTTCCA′。扩增产物为188bp。βactin：上游引物：5′GCTCTCTTCCAGCCTTCCTTC 3′；下游引物：5′AGAGCCACCAACCCACACAGAG 3′。扩增产物为261bp。反应条件为：95℃ 1min，55℃ 1min，72℃ 1min，25个循环。反应产物经17g/L琼脂糖凝胶电泳、照相。
1.5 统计学分析 应用统计学软件SPSS for Windows 11.5对实验数据进行χ2检验。P0.05表示有显著性差异。
2 结 果。
2.1 RTPCR结果 RTPCR检测结果显示，32例肾透明细胞癌组织中，survivin表达的有18例，占56.25%(图1)。图1 Survivin表达的RTPCR的结果（略）。
2.2 免疫组化染色结果 Survivin在正常肾组织中几乎无表达，而肿瘤病例中53例中有33例survivin表达阳性，阳性率为62.3%(图2)。图2 Survivin在肾透明细胞癌的表达（略）。