三种染色方式下四种核酸染料的灵敏度比较

【摘要】 目的 探讨补镁对高脂高糖膳食诱导大鼠肥胖模型形成的影响及作用机制。使用染胶法、染样品法及后染法比较溴化乙锭（EB）与3种新型核酸染料GoldViewna II、GoldView及DNA Green染色DNA的灵敏度。方法 在琼脂糖凝胶电泳中，分别在3种染色方式下使用4种核酸染料对凝胶中的DNA进行染色，观察并分析电泳结果。结果 核酸染料比较结果：GoldViewna II的灵敏度最高，DNA Green的灵敏度与EB相当，GoldView的灵敏度略低于EB。染色方式比较结果：使用染胶法的灵敏度最高，后染法次之，染样品法最低。结论 三种新型核酸染料完全可以替代EB，用于琼脂糖凝胶电泳DNA染色。使用新型核酸染料建议采用染胶法染色DNA。

【关键词】 琼脂糖凝胶电泳 核酸染料 溴化乙锭。

Abstract：Objective To compare the sensitivity of ethidium bromide(EB)and three types of new nucleic acid dye:GoldViewna II,GoldView and DNA Green staining DNA by three staining methods:prestaining gel method,prestaining sample method and poststaining method.Methods Four nucleic acid dyes were used to stain DNA respectively by three staining menthods in agarose gel electrophoresis and the results were observed and analyzed.Results The comparative result of nucleic acid dye:the sensitivity of GoldViewna II is highest of all;the sensitivities of DNA Green and EB are in the same degree;the sensitivity of GoldView is less than EB.The comparative result of staining method:The sensitivity of staining DNA by prestaining gel method is highest of the three and poststaining method is higher than prestaining sample method.Conclusion These three types of new nucleic acid dye can substitute for EB as a general dye to stain DNA in agarose gel electrophoresis.It is recommended to use Prestaining gel method when using new type of nucleic acid dye.

Key words:agarose gel electhophoresis; nucleic acid dye; Ethidium bromide。

溴化乙锭（EB）曾是琼脂糖凝胶电泳中使用最为普遍的核酸染料，被广泛应用于观察、检测核酸，具有操作简单、快速及灵敏度高等特点［1］。但作为一种强诱变剂，EB具有高致癌性。废弃的EB染液易污染环境，必须进行净化处理，给实验研究人员带来诸多不便［1］。

近年来陆续推出了多种新型核酸染料，比如GoldViewna II，GoldView，DNA Green等。这些核酸染料的灵敏度是否高于EB，能否替代EB广泛用于DNA的染色是人们关心的问题。

有研究显示EB染色DNA使用后染法比较好［2］。那么，新型核酸染料使用染胶法、后染法还是染样品法的检测灵敏度最高，最实用呢？

本文在3种染色方式下分别使用4种核酸染料对凝胶中的DNA进行染色。在3种染色方式下比较4种核酸染料的灵敏度，为相关实验中选择合适的核酸染料和染色方法提供参考。

1 材料与方法。

1.1 主要试剂。

电泳级琼脂糖购自西班牙BIOSCIENCE公司。分子量标准DL15 000＋2 000购自Takara公司。EB为Sigma公司产品，工作浓度为0.5 μg/ml。GoldViewna II型核酸染料（5 000×）购自北京博大泰克生物基因技术有限责任公司，工作浓度为1×.GoldView（20 000×）为北京赛百盛基因技术有限公司产品，工作浓度为1×；DNA Green（10 000×）为天泽基因工程有限公司产品，染胶与染样品的工作浓度为1×，后染的工作浓度为10×；其余试剂均为国产分析纯。

1.2 主要仪器。

Bio—Rad电泳系统及凝胶成像系统。

1.3 方法。

1.3.1 染胶法 同时制备四块1％琼脂糖凝胶。在凝胶凝固前，分别加入4种染料。待凝胶冷却凝固后，放入同一电泳槽中。于不同泳道中分别加入0.5 ng、1 ng、2 ng、5 ng、10 ng、20 ng及50 ng的DL 15 000＋2 000.使用5V/cm的电压进行电泳，最后用凝胶成像系统观察拍照。