高效液相色谱法测定氢氯噻嗪原料的含量

【摘要】 　　目的：建立氢氯噻嗪原料药的含量测定方法。方法：采用C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.1 mol/L磷酸二氢钠乙腈（9∶1）（用磷酸调节pH值至3.0）为流动相，检测波长271 nm，流速1.5 mL/min，柱温30 ℃。结果：氢氯噻嗪浓度在0.004～0.20 mg/mL浓度范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9999，n=7），加样回收率99.82%，RSD=0.98%。结论：该方法专属性强，灵敏度高，重复性好，操作简便，适用于氢氯噻嗪原料的质量控制。

【关键词】 氢氯噻嗪 高效液相色谱法 含量测定。

HPLC Determination of Hydrochlorothiazide。

ZENG Tan, ZHOU Lin。

(Chongqing Institute for Drug Control, Chongqing 400121, China) 　　［Abstract］ Objective:To develop an HPLC method for the determination of Hydrochlorothiazide. Methods: The chromatographic separation was performed on a C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) held in the oven of 30 ℃. The mobile phase consisted of a degassed mixture of 0.1 mol/L monobasic sodium phosphate and acetonitrile (9:1), adjusted with phosphoric acid to a pH of 3.0. The flow rate was 1.5 mL/min and UV detection wavelength was 271 nm. Results: The calibration of the responses of hydrochlorothiazide ranged from 0.004 to 0.20 mg/mL with a correlation coefficient of 0.9999, recovery rate of 99.82% and RSD=0.98%. Conclusions: The method proves to be quick, simple and sensitive. It could be applied into the quality control of hydrochlorothiazide.

［Key words］ Hydrochlorothiazide; High performance liquid chromatography; Determination of content 　　氢氯噻嗪是一种临床应用十分普遍的药物，主要抑制髓袢升支皮质部对Na+和Cl的重吸收，使肾脏对氯化钠的排泄增加而产生利尿作用，常与其他降压药物配合作用治疗高血压。原质量标准采用甲醇钠滴定法测定其含量［1］，毒性较大且操作不便，方法精密度差。本研究参考国内外氢氯噻嗪原料的质量标准［2］，建立了氢氯噻嗪含量测定的HPLC方法。

1 仪器和试药 　　Agilent 1100高效液相色谱仪（配有紫外检测器及二极管阵列检测器），AE240型电子天平（瑞士梅特勒）。磷酸二氢钠（分析纯，重庆北碚化学试剂厂）、乙腈（色谱纯，山东禹王实业有限公司化工分公司）、水（二次蒸馏水）、氢氯噻嗪对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100309200702，含量99.8%）。

2 方法与结果。

2.1 测定波长选择 　　取氢氯噻嗪对照品20 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇乙腈（1∶1）5 mL溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液5 mL置50 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，在200～400 nm波长处扫描，扫描结果见图1。由图可见，最大吸收波长为224 nm、271 nm。224 nm波长靠近末端吸收且杂质在此波长处吸收较大，故选择271 nm做为检测波长。

图1 氢氯噻嗪紫外扫描图谱（略）。

2.2 色谱条件及系统适用性实验 　　色谱柱：pHenomenex C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.1 mol/L磷酸二氢钠溶液乙腈（9∶1）（用磷酸调节pH值至3.0）；测定波长：271 nm；流速：1.5 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。在此色谱条件下，氢氯噻嗪峰的保留时间为11.217 min，理论塔板数为19 054，氢氯噻嗪峰与最近杂质峰的分离度为13.58。色谱图见图2。

图2 氢氯噻嗪原料色谱图（略）。

2.3 线性范围 　　精密称取氢氯噻嗪对照品20.00 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇乙腈（1∶1）5 mL溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。分别量取对照品储备液适量，用流动相稀释制成每毫升含0.004、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.20 mg的溶液。照上述色谱条件，分别各取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为x，峰面积为y，计算回归方程为：y=1.5553+24769.1x，r=0.9999（n=7），表明氢氯噻嗪在0.004～0.20 mg/mL浓度范围内与峰面积的线性关系良好。

2.4 检测限与定量限 　　取浓度为0.1004 μg/mL的氢氯噻嗪对照品溶液进样10 μL，氢氯噻嗪峰的信噪比为3.7。以S/N为3和10分别计算氢氯噻嗪的检测限和定量限，分别为0.0814 μg、0.269 μg。