川芎嗪对大鼠脑缺血/再灌注肝损伤的影响
【摘要】 目的: 观察川芎嗪对大鼠脑缺血—再灌注肝损伤的影响。方法: 采用Pulsinelli的方法建立大鼠急性全脑缺血/再灌注模型。将Wistar大鼠随机分为3组，即假手术对照组、缺血/再灌注组（ I/ R）和川芎嗪+ 缺血/ 再灌注组（ TMP + I/ R） ，分别测定各组肝组织超氧化物歧化酶（ SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH—PX）、丙二醛（MDA）、Ca2 +—Mg2 +—ATP酶的含量及肝细胞形态学变化。结果:川芎嗪治疗组肝组织MDA含量明显低于缺血/再灌注组（ P 0. 01） ， SOD， GSH—PX， Ca2+—Mg2+—ATP酶的含量均明显高于缺血再灌注组（ P 0. 01） ，肝细胞形态学异常变化明显减轻。结论:川芎嗪能减少大鼠脂质过氧化，改善ATP酶的功能，减轻大鼠脑缺血/再灌注所致肝脏损伤。
川芎嗪（ Tetramethylpyrazine， TMP）是从川芎中提出的一种生物碱，具有解痉、扩管、降压等广泛的生物作用，已泛应用于心血管疾病的治疗。岑得意等［1］用大鼠脑梗塞模型观察川芎嗪对大鼠脑梗塞的作用，结果显示川芎嗪可显著改善大鼠异常神经症状和抑制ALP活性的下降，显著抑制ADP致血小板的聚集。笔者以往的研究表明［2］，川芎嗪对脑缺血/再灌注损伤具有保护作用，TMP可减少脑缺血/再灌注损伤中皮层和海马NO 的生成，降低NO的损害作用，从而对脑缺血产生保护作用，对癫痫大鼠模型神经细胞的损伤具有保护作用［3，4］。脑缺血/ 再灌注损伤是重型颅脑损伤病人减压术后的一种常见病症，由此而引发的多脏器功能损害更使病情复杂化，增加了救治难度。肝脏作为最易受累的器官之一，在临床和实验中受到人们的高度重视。于是我们采用Pulsinelli 等的方法建立大鼠急性全脑缺血/ 再灌注模型，旨在研究川芎嗪对大鼠脑缺血/再灌注肝损伤的作用，并探讨其可能机制，从而为临床预防和治疗脑缺血/ 再灌注损伤提供实验依据。
1材料与方法 1.1药品及试剂川芎嗪注射液40mg/2 mL （北京第四制药有限公司生产，批号20060701），SOD， GSH—PX，MDA， Ca2+—Mg2+—ATP酶试剂盒（北京中山生物技术有限公司生产）。
1.2实验动物与分组健康雄性Wistar大鼠48只（广州医学院动物中心提供），体重200～250 g ，随机分成3组（n = 16） ，即假手术对照组、缺血/ 再灌注组（ I/ R） 及川芎嗪+缺血/ 再灌注组（ TMP + I/ R） ，于术前30 min经尾静脉给予川芎嗪8 mg/kg，其余两组同时给予等体积生理盐水。
1.3模型制备与标本采集缺血/ 再灌注组和川芎嗪+ 缺血/ 再灌注组按Pulsinelli等的方法建立大鼠急性全脑缺血/再灌注模型，即20 %乌拉坦2 ml/ kg 腹腔麻醉，电灼凝固双侧椎动脉，夹闭双侧颈总动脉，造成全脑缺血，30 min 后松夹，开放双侧颈总动脉灌流60min。对照组仅做动脉分离，不进行电凝和夹闭。全部动物于实验1.5h末经髂动脉取血并迅速放血致死，取肝左中叶组织匀浆，同时取少许肝左中叶组织行光、电镜观察。
1.4指标测定SOD活性用邻苯三酚自氧化法检测［5］，MDA含量测定用改良硫代巴比妥酸（ TBA）比色法测定［6］， 5. 5，二硫对二硝基苯甲酸（DTNB）比色法测定GSH—PX［7］，定磷法测定Ca2+—Mg2 +—ATP酶［8］。光镜检查:取肝组织经10%甲醛固定，石腊包埋切片， HE染色，观察切片。电镜检查:肝组织用生理盐水漂洗后2. 5%戊二醛固定，送电镜室，经四氧化锇双固定，脱水、包埋、切片等操作后，在日立H—600透视电镜下观察并拍片。 1.5统计学分析所有数据均用均数±标准差（ x±s）表示，组与组之间采用t 检验。
2结果。
2.1肝组织中SOD、GSH—PX及MDA含量的变化大鼠脑缺血/再灌注后肝组织SOD、GSH—PX活性下降，而MDA含量明显上升，与假手术对照组比较有显著性差异（ P 0. 01） 。 川芎嗪治疗组肝组织中MDA含量明显低于缺血再灌注组（ P 0. 01） ， SOD、GSH—PX的含量均明显高于缺血再灌注组（ P 0. 01）。见表1。
表1 各组大鼠肝组织SOD、GSH—PX、MDA、Ca 2 +—Mg2 +—ATP酶的测定结果（略）。
注: △与假手术对照组比较， P 0. 01; * 与缺血再灌注组（ I/R）比较， P 0. 01。
2.2肝组织ATP 酶活性变化大鼠肠缺血再灌注后肝组织Ca2 +—Mg2 +—ATP酶活性下降，与假手术对照组比较有显著性差异（ P 0. 01） 。川芎嗪治疗组肝组织中Ca2 +—Mg2 + —ATP酶活性明显高于缺血再灌注组（ P 0. 01）。见表1。
2.3肝细胞形态学改变光镜下假手术对照组肝小叶正常，肝细胞索清晰，围绕中央静脉呈放射状排列;缺血再灌注组肝小叶结构正常，肝细胞水肿，肝窦淤血变窄;川芎嗪治疗组肝小叶结构正常，肝细胞索及肝窦排列整齐，未见肝细胞水肿。电镜下假手术对照组肝细胞器正常;缺血再灌注组肝细胞有空泡形成，线粒体肿胀，胞浆疏松化，部分肝细胞核固缩、变小;川芎嗪治疗组肝细胞损伤减轻，内未见空泡，线粒体稍肿胀。