不同产地金银花中绿原酸和木犀草苷含量的HPLC法测定
作者：宋平顺，卫玉玲，陶耀武，丁永辉。
【摘要】 目的 通过HPLC法测定不同地区人工栽培金银花中绿原酸和木犀草苷的含量，考察甘肃金银花质量状况。方法 绿原酸色谱柱：C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈—0.4 %磷酸（13∶87），流速为1.0 mL/min，检测波长为327 nm。木犀草苷色谱柱：苯基色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈—0.5 %冰醋酸（二元梯度洗脱），流速为1.0 mL/min，检测波长为350 nm。结果 甘肃不同地方栽培的金银花中，绿原酸、木犀草苷含量分别占2.16 ％～3.63 %、0.0532 %～0.1407 %，均符合中国药典以及补充检验方法的规定。结论 甘肃栽培品金银花的质量与山东、河南道地产区相当。
金银花为常用中药材，具有清热解毒、凉散风寒的功效，《中国药典》收载为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb的干燥花蕾或带初开的花[1]。金银花具有广泛的生态适应性，全国除西藏、青海、新疆、宁夏、内蒙古和海南以外，其他省（市、区）均有分布，野生资源比较丰富[2]。我国人工栽培金银花已有270多年的历史，近年来种植发展迅猛，山东、河南、湖南、河北、山西、甘肃、四川、贵州、新疆等地都有栽培，以山东、河南为主产区，习惯认为山东产量大，而河南品质佳[2]。金银花除在药品、保健、轻工业等领域广泛应用外，同时也是一种生态环保型的经济林木，根系发达，具有蓄水保土和防风固沙的作用，茎叶还可以做牛羊饲料，还是美化环境的花卉，人工栽培金银花其社会经济效益十分显著。
甘肃野生金银花分布于天水、陇南地区，仅有资源而无商品，2001年以来，金昌、白银、兰州和陇南等地人工栽培成功，其中金昌、陇南已经建立商品基地。目前，国内关于金银花的质量主要以绿原酸、异绿原酸、咖啡酸和挥发油等指标成分进行评价[3—5]，甘肃人工栽培的金银花质量评价未见报道，本文采用HPLC法测定甘肃栽培金银花中绿原酸和木犀草苷含量，并与国内其他产区比较，为今后甘肃发展人工资源和选择GAP适宜的基地提供依据。
1仪器、试药与样品。
1.1仪器。
美国Waters515型泵、Waters717自动进样器、Waters2487型紫外检测器、超声波清洗器KQ2500（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2试药。
绿原酸（110753—200413）、木犀草苷（11720—200603），供含量测定，由中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余试剂为分析纯。
1.3样品。
金银花样品分别购于金昌（金川宁远堡镇）、白银（靖远）、兰州（皋兰、兰州市城关区）和陇南（徽县）等地；山东、河南、四川为市售商品。以上均经作者严格鉴定。
2方法与结果。
2.1 绿原酸含量测定[1]。
2.1.1色谱条件。
大连伊利特C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）；流动相为乙腈—0.4 %磷酸（13∶87）；流速1.0 mL/min；检测波长327 nm；柱温为室温。理论塔板数按绿原酸计算应不低于1000。
精密称取绿原酸对照品10.2 mg，置50 mL棕色量瓶中，用50 %甲醇稀释制成每毫升含45 μg的溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备。
取样品（过3号筛）0.5 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加50 %甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用50 %甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加50 %甲醇定容至刻度即得。
图1对照品HPLC图。
图2样品HPLC图。
2.1.4 样品的测定。
14批金银花样品按“供试品溶液制备”方法制备样品，精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，以干燥品计算含量，结果见表1。
2.2.1色谱条件。
苯基色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）；流动相为乙腈—0.5 %冰醋酸，二元梯度洗脱，0～15 min，乙腈10 ％～20 %，15～30 min，乙腈20 %，30～40 min，乙腈20 ％～30 %；流速1.0 mL/min；检测波长350 nm；柱温为室温。理论塔板数按木犀草苷计算应不低于20000。
精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥12 h的木犀草苷对照品9.40 mg，置50 mL量瓶中，用70 %乙醇定容即得对照品储备溶液。