了哥王中芫花素含量的高效液相色谱法测定
【摘要】 目的建立了哥王中芫花素含量测定方法，为了哥王的质量评价提供依据。方法采用HPLC法测定其芫花素的含量，色谱柱：Alltech ODS (4.6 mm ×250 mm, 5 μm)；流动相：甲醇—0.2 %磷酸水溶液 (体积比55∶45)；流速为1.0 ml·min—1；检测波长346 nm，柱温为35 ℃；进样量10 μl。结果芫花素在0.24～2.40 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，其回归方程为Y=84 069X+34.648，r=0.999 8。平均回收率为100.57%，RSD=1.76%(n=5)。结论该法具有操作简便准确，回收率好，精密度、重复性高，分析快速的优点，可作为了哥王药材的质量控制方法。
Abstract:ObjectiveTo establish a method for the determination of the content of genkwanin in Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey (W.indica ).MethodsThe content of genkwanin in W.indica was determined by HPLC with Alltech C_(18) (250 mm×4.6 mm, 5 μm) column. A mixture of methanol and 0.2% phosphoric acid solution (55∶45)was used as mobile phase, the flow rate was 1.0 ml·min—1 and UV detection wavelength was at 346 nm. Temperature was 35 ℃ and sample size was10 μl.ResultsThe linear relationship was good within the range of 0.24～2.40 μg (r=0.999 8). The average recovery was 100. 57% , RSD was 1.76%. ConclusionThe method is simple and accurate with good separation. The results are sensitive and reproducible and may be used in the quality control of genkwanin in Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey.
Key words:HPLC; Wikstroemia indica; Genkwanin； Determination 中药了哥王为瑞香科植物了哥王Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey.的干燥根或根皮,主产于两广，浙江、江西也有出产。性味苦寒、微辛，有毒。功能清热解毒，化痰散结，消肿止痛。主治风湿性关节炎，淋巴结炎，瘰疬，痈肿，跌打损伤，具有抑菌、抗病毒抗炎镇痛、止咳祛痰等作用。本品有毒，对皮肤有刺激性，所含树脂有强烈的泻下作用［1］，文献报道含有黄酮、多糖类、酸性树脂、挥发油、甾体类、皂苷等成分。了哥王含有南荛酚、牛蒡苷元、松脂酚、山萘酚等多种化学成分，还含芫花素、西瑞香素等［2］。了哥王提取液中有效成分的含量测定目前尚无研究报道，因此，我们采用高效液相色谱法测定了哥王超声提取液中芫花素的含量。现报道如下。
1 仪器与材料。
1.1 仪器Didnex—P680高效液相色谱仪；PDA—100 Photodiote Array 检测器；CQ2250超声波清洗仪(上海声源仪器有限公司)；FA1104N 电子分析天平（上海精科天平厂）。
1.2 试药芫花素对照品由广州药物研究所提供，经归一法标定，含量为 99.3%，流动相甲醇为色谱纯（美国Tedia公司），水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
1.3 药材了哥王购于广州市清平药材市场，由广东药学院天然产物化学系王定勇教授鉴定为了哥王Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey的干燥根茎。
2 方法与结果。
2.1 色谱条件色谱柱为Alltech ODS柱（4. 6 mm ×250 mm, 5 μm,）；流动相为甲醇—0.2 %磷酸溶液（体积比55∶45）；流速1.0 ml·min—1；检测波长346 nm；进样量10 μl；柱温：35℃；在此条件下供试品中芫花素成分能与其他成分达到较好的分离。对照品、供试品在约19 min相同时间有一色谱峰，见图1。
2.2 对照品溶液的制备精密称取芫花素对照品12 mg，置于50 ml的容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成0.24 mg·ml—1的对照品溶液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2.3 供试品溶液的制备取了哥王生药研成细粉，过40目筛，精密称取细粉约25 g，置具塞锥形瓶中，加入100 ml甲醇，称定重量，超声处理45 min，放置室温，加溶剂补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2.4 线性关系考察分别精密吸取芫花素对照品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，10.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取10 μl，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定其峰面积，并以对照品含量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，得回归方程为：Y=84 069X+34.648（r=0.999 8）。结果表明：芫花素对照品在0.24～2.40 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 精密度实验精密吸取同一份供试品溶液10 μl，按上述色谱条件，重复进样7次，测定供试品溶液中芫花素峰面积值。结果供试品峰面积值的相对标准偏差RSD=1.46% (n=7)，表明仪器精密度良好。